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大鱼和珊瑚

新虫 (初入文坛)

[求助] 实时荧光定量PCR扩增产物大小 已有1人参与

使用荧光染料法的实时荧光定量PCR的产物可以300bp以上吗?

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辛雨237

铁杆木虫 (著名写手)

春暖花开
2楼2018-01-09 22:54:57
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kshdd

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
500以下没有问题
3楼2018-01-09 22:55:14
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Liumengya

木虫 (正式写手)

不是一般建议100左右吗?(? ̄?^ ̄??) 嫌弃你

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4楼2018-01-10 00:23:12
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wzt1417

新虫 (小有名气)

5楼2018-01-10 00:41:52
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大鱼和珊瑚

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by kshdd at 2018-01-09 22:55:14
500以下没有问题

我之前看以前的帖子说针对荧光染料法,其实扩增产物的长短没有一定要300bp以下,之所以300bp以下只是为了可以高效率,高灵敏度。
不知道对不对

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6楼2018-01-11 19:05:47
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大鱼和珊瑚

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by kshdd at 2018-01-09 22:55:14
500以下没有问题

我的扩增产物是302bp,退火温度是66度,为了可以提高一下扩增效率,所以我的72度延伸时间定了2分钟,45个循环,不知道对不对
新手上路,求指教

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7楼2018-01-11 19:10:52
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kshdd

金虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 大鱼和珊瑚 at 2018-01-11 19:10:52
我的扩增产物是302bp,退火温度是66度,为了可以提高一下扩增效率,所以我的72度延伸时间定了2分钟,45个循环,不知道对不对
新手上路,求指教
...

一般推荐的是100-200bp,但有时候实验设计会不尽人意,所以500bp也是可以的,有文献就用到590bp;另外,关于延伸时间,现在的聚合酶的扩增效率为1min是1000bp,所以你可以根据你的片段长度进行换算,若是定量的话,我感觉72℃ 30s就可以了。
8楼2018-01-11 20:58:48
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kshdd

金虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 大鱼和珊瑚 at 2018-01-11 19:05:47
我之前看以前的帖子说针对荧光染料法,其实扩增产物的长短没有一定要300bp以下,之所以300bp以下只是为了可以高效率,高灵敏度。
不知道对不对
...

可以这么理解。多看看资料,做几次就知道了
9楼2018-01-11 21:01:09
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大鱼和珊瑚

新虫 (初入文坛)

10楼2018-01-11 23:14:47
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