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急求：昆虫病原线虫DNA提取不出来
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小虫最近在提取昆虫病原线虫DNA，可是提了很多次均提取不出来。 提取方法如下：将单条线虫放于WLB缓冲液中，加2uL蛋白酶K（600ug/ml），于-80℃ 10min，65℃ 1h，95℃15min，放于-20℃保存。跑电泳检测检测不出来，直接拿来做PCR也P不出来。 尝试试验： 1.可能是试剂配的有问题，于是将试剂重新配制，灭菌冷藏，发现还是提取不出来。 2.可能提取的DNA太微量，电泳检测不宜检测出来，于是挑取大量线虫和数条线虫分别提取DNA电泳检测，仍然没有结果。 3.可能是冻融一次不够，于是将线虫重复-80℃ 10min，65℃ 1h的步骤两次，电泳检测，仍没有结果。 4.可能是95℃15min将线虫DNA解链，不宜检测，在此查询了资料，并询问了相关老师，说会有一定影响，但是不影响PCR和电泳检测。 是在是没办法了，各位虫友发表意见，帮帮忙。 在此感谢大家了！ [ Last edited by 星海心愿 on 2009-3-3 at 16:04 ] |
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3楼2009-03-03 20:50:13
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星海心愿(金币+3,VIP+0):谢谢分享 不过我查文献关于昆虫病原线虫的DNA都用的这个方法 我再将范围放宽些 采用常规方法试一试 3-4 14:07
星海心愿(金币+4,VIP+0): 5-5 12:12
星海心愿(金币+3,VIP+0):谢谢分享 不过我查文献关于昆虫病原线虫的DNA都用的这个方法 我再将范围放宽些 采用常规方法试一试 3-4 14:07
星海心愿(金币+4,VIP+0): 5-5 12:12
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提取方法如下：将单条线虫放于WLB缓冲液中，加2uL蛋白酶K（600ug/ml），于-80℃ 10min，65℃ 1h，95℃15min，放于-20℃保存。 这个方法感觉不像常规提DNA的方法，当然本人没提过线虫的。 建议采用常规的方法提取试试，比如提动物DNA的试剂盒。 不用试剂盒可以用CTAB法。 一般提DNA我们都要用液氮研磨，直接放于WLB缓冲液中，加2uL蛋白酶K（600ug/ml），可以吗？？？ |
2楼2009-03-03 20:48:06
shenye.judy
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4楼2009-03-03 20:50:32
