| 查看: 311 | 回复: 3 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
急求：昆虫病原线虫DNA提取不出来
|
|||
|
小虫最近在提取昆虫病原线虫DNA，可是提了很多次均提取不出来。 提取方法如下：将单条线虫放于WLB缓冲液中，加2uL蛋白酶K（600ug/ml），于-80℃ 10min，65℃ 1h，95℃15min，放于-20℃保存。跑电泳检测检测不出来，直接拿来做PCR也P不出来。 尝试试验： 1.可能是试剂配的有问题，于是将试剂重新配制，灭菌冷藏，发现还是提取不出来。 2.可能提取的DNA太微量，电泳检测不宜检测出来，于是挑取大量线虫和数条线虫分别提取DNA电泳检测，仍然没有结果。 3.可能是冻融一次不够，于是将线虫重复-80℃ 10min，65℃ 1h的步骤两次，电泳检测，仍没有结果。 4.可能是95℃15min将线虫DNA解链，不宜检测，在此查询了资料，并询问了相关老师，说会有一定影响，但是不影响PCR和电泳检测。 是在是没办法了，各位虫友发表意见，帮帮忙。 在此感谢大家了！ [ Last edited by 星海心愿 on 2009-3-3 at 16:04 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
今天基金会出结果吗？20260819
已经有8人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有115人回复
-
filecode，4个jtjc了
已经有8人回复
-
2027广东省杰青
已经有10人回复
-
朋友圈看到的
已经有8人回复
-
时间戳变了，能看出什么问题？
已经有14人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有30人回复
-
今天放榜吗？
已经有11人回复
-
快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。
已经有7人回复
-
什么时候开奖？
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
shenye.judy
木虫 (正式写手)
- 应助: 25 (小学生)
- 金币: 2350.7
- 红花: 1
- 帖子: 501
- 在线: 53.7小时
- 虫号: 310766
- 注册: 2006-12-24
- 性别: MM
- 专业: 植物遗传学
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
星海心愿(金币+3,VIP+0):谢谢分享 不过我查文献关于昆虫病原线虫的DNA都用的这个方法 我再将范围放宽些 采用常规方法试一试 3-4 14:07
星海心愿(金币+4,VIP+0): 5-5 12:12
星海心愿(金币+3,VIP+0):谢谢分享 不过我查文献关于昆虫病原线虫的DNA都用的这个方法 我再将范围放宽些 采用常规方法试一试 3-4 14:07
星海心愿(金币+4,VIP+0): 5-5 12:12
|
提取方法如下：将单条线虫放于WLB缓冲液中，加2uL蛋白酶K（600ug/ml），于-80℃ 10min，65℃ 1h，95℃15min，放于-20℃保存。 这个方法感觉不像常规提DNA的方法，当然本人没提过线虫的。 建议采用常规的方法提取试试，比如提动物DNA的试剂盒。 不用试剂盒可以用CTAB法。 一般提DNA我们都要用液氮研磨，直接放于WLB缓冲液中，加2uL蛋白酶K（600ug/ml），可以吗？？？ |
2楼2009-03-03 20:48:06
shenye.judy
木虫 (正式写手)
- 应助: 25 (小学生)
- 金币: 2350.7
- 红花: 1
- 帖子: 501
- 在线: 53.7小时
- 虫号: 310766
- 注册: 2006-12-24
- 性别: MM
- 专业: 植物遗传学
3楼2009-03-03 20:50:13
shenye.judy
木虫 (正式写手)
- 应助: 25 (小学生)
- 金币: 2350.7
- 红花: 1
- 帖子: 501
- 在线: 53.7小时
- 虫号: 310766
- 注册: 2006-12-24
- 性别: MM
- 专业: 植物遗传学
4楼2009-03-03 20:50:32
