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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 化学分析 » ABTS+吸光度测试
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星城辛未

木虫 (正式写手)

[求助] ABTS+吸光度测试 已有3人参与

按照文献中的方法，以ABTS（7mmol, 10 equiv.）+K2S2O8(4.9mmol, 7 equiv.)的水溶液按1:1的体积比混合，避光情况下储存12-16h，第二天以乙醇稀释40-60倍，摇匀，静置5min，放入比色皿中测734nm的吸光度（0.7左右），测试吸光度随时间变化关系，时长为30min，发现吸光度有很明显的下降，30min大概降到0.45左右，换做水稀释时，吸光度下降更为严重，30min大概降到0.15左右。后面要测特定物质湮灭自由基的能力，这种情况势必严重干扰结果，请问业内的专家们，出现这种问题的原因主要是什么？
（1）对ABTS、K2S2O8、乙醇和水等试剂的纯度有没有严格的要求？
（2）配置好的母液大概可以使用多久？
（3）还有哪些可能出问题的地方？
望不吝赐教，谢谢！！
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1楼 2018-01-08 15:55:42
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星城辛未

木虫 (正式写手)
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7楼: Originally posted by 疯人院病号 at 2018-05-29 09:07:44
楼主你的阳性对照是不是设置有误？

我查的文献是说PBS或者乙醇稀释比较好，水应该问题也不大，阳性对照没问题，溶剂加ABTS测试液。留个微信或者邮箱？资料可以发给你
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8楼2018-05-29 09:35:28
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星城辛未

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 疯人院病号 at 2018-05-28 18:12:16
请问楼主是怎么解决的？我正要做这个实验呢，打算用水稀释，请问你的母液可以放置多久？用什么来稀释的？还有你的空白调零是怎么设置的呢？请楼主帮帮忙。。。

配置完避光放置12-14h左右，最好尽快使用，不超过3天。我是用无水乙醇稀释的，用测试样品的溶剂作为阴性对照，溶剂+ABTS测试液作为阳性对照
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5楼2018-05-28 19:27:31
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星城辛未

木虫 (正式写手)
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13楼: Originally posted by 日渐秃头 at 2018-11-26 21:55:55
楼主你好 麻烦问下吸光度怎么调到0.7的...我稀释后吸光度为负数呢……

拿无水乙醇稀释的，倍数太高了吧？还是参比没放好？我没出现过
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14楼2018-11-27 09:19:44
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星城辛未

木虫 (正式写手)
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15楼: Originally posted by 日渐秃头 at 2018-11-28 14:24:10
等一等 这个需要参比调零吗？？？我好像没看到过 用什么调零呢？
...

如果你是用紫外光谱仪，那就得用溶剂先调零么？用酶标仪倒不需要
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16楼2018-11-29 09:10:41
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柠檬酸循环

新虫 (初入文坛)
我配好的7.4mM的ABTS和2.6mM的过硫酸钾混匀4℃过夜后其氧化自由基工作液的吸光度只有0.1~0.2啊？不知道4度影响大不大，目前还没想清楚原因，求指导

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18楼2019-02-25 13:57:59
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普通回帖

1970757203_s

金虫 (小有名气)
请问楼主问题解决了吗？
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2楼2018-05-12 21:34:44
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星城辛未

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2楼: Originally posted by 1970757203_s at 2018-05-12 21:34:44
请问楼主问题解决了吗？

解决了

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3楼2018-05-12 23:44:31
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疯人院病号

禁虫 (初入文坛)
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4楼2018-05-28 18:12:16
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疯人院病号

禁虫 (初入文坛)
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6楼2018-05-28 21:32:06
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疯人院病号

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7楼2018-05-29 09:07:44
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疯人院病号

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9楼2018-05-30 17:39:59
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gcc5413

木虫 (正式写手)
同求，123269799@qq.com,谢谢楼主
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10楼2018-06-03 21:58:30
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