24小时热门版块排行榜    

查看: 2749  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

实验室410

金虫 (正式写手)

[求助] G418筛选稳定细胞系

本人最近正在筛选稳定细胞系,是neo抗性的,在293FT、KP、LCL细胞中筛选,G418浓度多少合适?我第一次是400、800、1200ug/mL,3天没有死亡;第二次是1500、2000、2500ug/mL,第二天还是没有明显死亡。大家都有什么经验,探讨一下。
回复此楼

» 猜你喜欢

像打不死的小强一样努力奋斗
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

memorize1991

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 实验室410 at 2017-12-28 13:12:17
还有细胞浓度有影响吗?...

细胞浓度不要太大,我是70%左右就加筛选药物了,细胞浓度大了,筛选药物的效果就不好了~

发自小木虫Android客户端
6楼2017-12-28 14:37:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

memorize1991

木虫 (正式写手)

我用G418筛的时候1mg/ml就够了,不过后来重建的稳转系用的puro。筛选浓度和你用的载体还有细胞有关吧,你可以查一下,我记得查过有书上给过G418在不同细胞中筛选浓度的大概范围。你这么高的浓度都不死有点儿不正常,可以等2天再看看~是否可能你的G418配的有问题?

发自小木虫Android客户端
2楼2017-12-28 12:35:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

实验室410

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by memorize1991 at 2017-12-28 12:35:48
我用G418筛的时候1mg/ml就够了,不过后来重建的稳转系用的puro。筛选浓度和你用的载体还有细胞有关吧,你可以查一下,我记得查过有书上给过G418在不同细胞中筛选浓度的大概范围。你这么高的浓度都不死有点儿不正常, ...

那一般情况几天会出现大量死亡呢?G418是用一半的生理盐水,一半的100mM的HEPES配置的,有问题吗?
像打不死的小强一样努力奋斗
3楼2017-12-28 13:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

实验室410

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by memorize1991 at 2017-12-28 12:35:48
我用G418筛的时候1mg/ml就够了,不过后来重建的稳转系用的puro。筛选浓度和你用的载体还有细胞有关吧,你可以查一下,我记得查过有书上给过G418在不同细胞中筛选浓度的大概范围。你这么高的浓度都不死有点儿不正常, ...

还有细胞浓度有影响吗?
像打不死的小强一样努力奋斗
4楼2017-12-28 13:12:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 316求调剂 +9 梁茜雯 2026-03-19 9/450 2026-03-25 23:01 by peike
[考研] 274求调剂 +8 顾九笙要谦虚 2026-03-24 12/600 2026-03-25 20:15 by 20021109
[考研] 081700 调剂 267分 +10 迷人的哈哈 2026-03-23 10/500 2026-03-25 12:12 by userper
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 271求调剂 +4 生如夏花… 2026-03-22 4/200 2026-03-25 11:25 by userper
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 求调剂 +5 林之夕 2026-03-24 5/250 2026-03-24 17:16 by dick_runner
[考研] 327求调剂 +5 prayer13 2026-03-23 5/250 2026-03-23 22:11 by 星空星月
[考研] 一志愿陕师大生物学071000,298分,求调剂 +3 SYA! 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:09 by macy2011
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap- 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap-
[考研] 求调剂一志愿海大,0703化学学硕304分,有大创项目,四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 考研调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 材料与化工(0856)304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 295材料求调剂,一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见