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mr_weller

铜虫 (初入文坛)

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[交流] 有关HPLC检测限和定量限的开展方法已有2人参与

请教怎样具体开展做 HPLC检测限和定量限的方法，最好有案例或者教学资料！万分感谢！回帖就散金

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原料药1

1楼 2017-12-18 11:30:10

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zl781202

金虫 (正式写手)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by mr_weller at 2017-12-25 08:51:41
有事例吗？因为我用不同浓度的样品做过，得到的信噪比不是成正比或者线性，比如说浓度0.01%的信噪比比浓度0.0125%的信噪比还要大
...

信噪比是成线性的，不成线性就没法稀释了，只是信噪比的线性R值肯定到不到了0.99。
你说的浓度0.01%的信噪比比浓度0.0125%的信噪比还要大，这个是很正常的，你同一个样，重新进样两次的信噪比也会不一样，只是差值不大。
我前面说了S/N≈10就是定量限，S/N≈3就是检测限。这个“≈”看你怎么去定义了，比如定量限，有的方法按照计算去稀释信噪比能做到8-16，有的方法则不行，稍微变下浓度，信噪比就发生大的变化，这个时候信噪比就可以取高点，20几，30几都可以。
还有不一定你做出S/N≈10的浓度就是定量限浓度，定量限还必须经过重复性和准确度的验证，才能确定量限的浓度。定量限重复性就是定量限浓度的样品重复进样6次，6次RSD不超过百分之几（这个根据你的浓度去查指导原则），定量限准确度就是采用”加样回收“的方式，计算杂质100%定量限浓度下的杂质回收率和RSD，也必须符合指导原则的要求。如果不能通过验证，则可以将该浓度放大20-50倍重新进行重复性和准确度的验证。
总而言之，S/N≈10只是帮助你初步确定定量限的浓度，得到的浓度经过验证后才能叫定量限浓度。检测限不需要验证。