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mr_weller

铜虫 (初入文坛)

[交流] 有关HPLC检测限和定量限的开展方法 已有2人参与

请教怎样具体开展做 HPLC检测限和定量限的方法,最好有案例或者教学资料!万分感谢!回帖就散金

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原料药1
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2楼2017-12-18 14:53:39
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zl781202

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做方法验证的话,就是用限度浓度的杂质对照品溶液进行稀释,可以是混合对照溶液,也可以是单个的杂质对照溶液,稀释后进样测定信噪比,S/N≈10就是定量限,S/N≈3就是检测限。
至于怎么稀释,可以根据限度浓度时的信噪比值进行计算
精益求精
3楼2017-12-18 16:19:50
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mr_weller

铜虫 (初入文坛)

原料药1
4楼2017-12-21 09:12:19
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zl781202

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by mr_weller at 2017-12-21 09:12:19
求教

这不是都已经说了吗,我晕
精益求精
5楼2017-12-22 09:45:01
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mr_weller

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zl781202 at 2017-12-22 09:45:01
这不是都已经说了吗,我晕

有事例吗?因为我用不同浓度的样品做过,得到的信噪比不是成正比或者线性,比如说浓度0.01%的信噪比比浓度0.0125%的信噪比还要大

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原料药1
6楼2017-12-25 08:51:41
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zl781202

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by mr_weller at 2017-12-25 08:51:41
有事例吗?因为我用不同浓度的样品做过,得到的信噪比不是成正比或者线性,比如说浓度0.01%的信噪比比浓度0.0125%的信噪比还要大
...

信噪比是成线性的,不成线性就没法稀释了,只是信噪比的线性R值肯定到不到了0.99。
你说的浓度0.01%的信噪比比浓度0.0125%的信噪比还要大,这个是很正常的,你同一个样,重新进样两次的信噪比也会不一样,只是差值不大。
我前面说了S/N≈10就是定量限,S/N≈3就是检测限。这个“≈”看你怎么去定义了,比如定量限,有的方法按照计算去稀释信噪比能做到8-16,有的方法则不行,稍微变下浓度,信噪比就发生大的变化,这个时候信噪比就可以取高点,20几,30几都可以。
还有不一定你做出S/N≈10的浓度就是定量限浓度,定量限还必须经过重复性和准确度的验证,才能确定量限的浓度。定量限重复性就是定量限浓度的样品重复进样6次,6次RSD不超过百分之几(这个根据你的浓度去查指导原则),定量限准确度就是采用”加样回收“的方式,计算杂质100%定量限浓度下的杂质回收率和RSD,也必须符合指导原则的要求。如果不能通过验证,则可以将该浓度放大20-50倍重新进行重复性和准确度的验证。
总而言之,S/N≈10只是帮助你初步确定定量限的浓度,得到的浓度经过验证后才能叫定量限浓度。检测限不需要验证。

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精益求精
7楼2017-12-25 15:20:48
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mr_weller

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by zl781202 at 2017-12-25 15:20:48
信噪比是成线性的,不成线性就没法稀释了,只是信噪比的线性R值肯定到不到了0.99。
你说的浓度0.01%的信噪比比浓度0.0125%的信噪比还要大,这个是很正常的,你同一个样,重新进样两次的信噪比也会不一样,只是差值 ...

受教了,感谢

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原料药1
8楼2017-12-26 16:34:59
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