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LJLJZS

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液破碎,破碎完自己析出絮状沉淀是怎么回事?

我表达的蛋白是在包涵体,要破碎菌液取包涵体,用的缓冲液是实验室自己配的,具体有什么我也不太清楚,大概有tris盐酸,溶菌酶,EDTA…破碎的时候没加pmsf,实验室的人说EDTA和pmsf作用差不多不用加。600ml菌液,离心收集菌,再用30ml这个缓冲液重悬破碎,一次破15ml,破碎8s,停10s,差不多半个小时吧,破碎完过了一会就自己析出很多絮状沉淀,液体变得很清亮。这是怎么回事,我的蛋白还能用么?

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skull123

木虫 (正式写手)

包涵体在超声波破碎后是会沉淀下来的,溶解不了,而且超声波破碎没有高压均质机弄的小,高压均质机重新碎的也会沉淀,但是沉淀慢一些。
4楼2017-12-17 13:11:36
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

包涵体蛋白大部分都是脂溶性的,很难溶解,我的理解应该是包涵体蛋白析出吧

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2楼2017-12-16 06:53:07
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Mr.XXX

新虫 (正式写手)

你可以再离心一下,对上清液和沉淀分别做下鉴定

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3楼2017-12-17 09:26:32
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