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千里寻万里路

新虫 (初入文坛)


[交流] 散金币,同源臂设计

在原核生物中做基因敲除,同源臂怎么设计?请大家支招。
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singlestarss

银虫 (正式写手)



千里寻万里路: 金币+1 2017-12-11 21:00:40
你用什么方法?

发自小木虫IOS客户端
2楼2017-12-10 05:48:17
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千里寻万里路

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
2楼: Originally posted by singlestarss at 2017-12-10 05:48:17
你用什么方法?

同源重组  PKD46质粒提供重组酶
3楼2017-12-11 21:00:05
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千里寻万里路

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
2楼: Originally posted by singlestarss at 2017-12-10 05:48:17
你用什么方法?

请问你知道怎样设计同源臂吗? 回答有金币送哦
4楼2017-12-11 21:01:52
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莫落

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
为了增加重组的概率,同源臂当然是长一点好,一般500bp还是挺好使的。
同源臂和抗性片段通过OverlapPCR连接。为了降低出现假阳性概率,最好用DpnI对打靶片段就行消化。最后打靶片段的浓度最好在几百ng/uL的样子。

发自小木虫IOS客户端
7楼2017-12-12 10:20:35
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arthrospira

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
以需敲除基因上、下游约20个碱基对序列的互补序列为同源臂。
8楼2017-12-12 10:23:51
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简单回复
gift5楼
2017-12-12 01:04   回复  
lyf18506楼
2017-12-12 09:52   回复  
祝福 祝福
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