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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 散金币，同源臂设计
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千里寻万里路

新虫 (初入文坛)

[交流] 散金币，同源臂设计

在原核生物中做基因敲除，同源臂怎么设计？请大家支招。
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1楼 2017-12-09 21:30:03
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singlestarss

银虫 (正式写手)
★
千里寻万里路: 金币+1 2017-12-11 21:00:40
你用什么方法？

发自小木虫IOS客户端
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2楼2017-12-10 05:48:17
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千里寻万里路

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by singlestarss at 2017-12-10 05:48:17
你用什么方法？

同源重组  PKD46质粒提供重组酶
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3楼2017-12-11 21:00:05
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千里寻万里路

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by singlestarss at 2017-12-10 05:48:17
你用什么方法？

请问你知道怎样设计同源臂吗？ 回答有金币送哦
赞一下 回复此楼
4楼2017-12-11 21:01:52
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莫落

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为了增加重组的概率，同源臂当然是长一点好，一般500bp还是挺好使的。
同源臂和抗性片段通过OverlapPCR连接。为了降低出现假阳性概率，最好用DpnI对打靶片段就行消化。最后打靶片段的浓度最好在几百ng/uL的样子。

发自小木虫IOS客户端
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7楼2017-12-12 10:20:35
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arthrospira

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
以需敲除基因上、下游约20个碱基对序列的互补序列为同源臂。
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8楼2017-12-12 10:23:51
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gift5楼
2017-12-12 01:04   回复  
lyf18506楼
2017-12-12 09:52   回复  
祝福 祝福
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