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长岛冰茶yo

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切质粒条带长度问题求助

双酶切质粒条带问题,求助
最近在做双酶切,用的NEB的酶mfeI和XhoI,双酶切质粒单一条带,mfei单酶切质粒目的条带非常暗而且在15000+处有条带(质粒条带11000bp左右),过夜切,3小时切,5小时,8小时都切过,切出来都是两条带或者没切开,第一次1ul的酶加6ul的质粒(10u体系),后面加的是1ul酶4ul质粒也没切开,今天做了20u的体系,1ul的酶10ul质粒,结果一样。实在找不到原因,求各位朋友相助。
下图分别是15000marker,1-双酶切,2-3mfeI单酶切,4-xhoI单酶切,从酶切结果来看,4号孔没问题也就是xhoi酶应该没问题,那么mfei到底出现什么问题呢?
酶切位点确定只有一个。

酶切质粒条带长度问题求助
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