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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 做过透析袋纯化DNA的请进
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speculiar

银虫 (小有名气)

[交流] 做过透析袋纯化DNA的请进

我做过两次，都回收不到DNA。好像DNA在仍然在胶里没跑出来。。。。。
请问做透析袋纯化大片段DNA有哪些要注意的？另外有没有更好的纯化大片段DNA的方法呢？
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1楼 2009-02-26 22:58:59
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boouy

银虫 (正式写手)
Qiagen有相关的kit!
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2楼2009-02-27 07:43:33
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icicle_me

铜虫 (初入文坛)
透析袋回收本身回收效率就比较低的，不知道你回收前的DNA亮度如何，
会不会透析袋没有扎紧，有没有倒转电流通电
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3楼2009-02-27 13:54:03
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speculiar

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by icicle_me at 2009-2-27 13:54:
透析袋回收本身回收效率就比较低的，不知道你回收前的DNA亮度如何，
会不会透析袋没有扎紧，有没有倒转电流通电

回收前亮度还可以。我的情况是DNA仍然在胶里根本没有跑动。
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4楼2009-02-27 19:35:50
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badyy0202

金虫 (小有名气)
我觉得可能是你的DNA里含的杂质太多了 有可能是和DNA很相似的大分子杂质 缠绕在一起
我之前做过一系列比较
后来发现kit回收的效果好 国外的提取基因组的kit的那个silica膜比国内kit的效率高
我当时做的时候 是用国内的试剂盒 然后拿了一个国外kit的滤器 拼一起的
回收效率很好的
但是国内专门提基因组的kit 回收效果也不行
即使写的是40kb左右 也回收不到片段
如果你没有进口的kit
还有个办法就是用低熔点琼脂糖
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5楼2009-03-01 01:17:49
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tangxiaofu1982

新虫 (初入文坛)
不知道楼主的DNA片段有多大?我以前有做过电洗脱透析回收,我的目标片段是200kb以上的，也有回收到，只不过回收后跑胶一看却只有20几kb。我电洗脱用的是那种普通的直流电泳，后来有一个国外回来的老师教我们做的时候，电洗脱人家是用脉冲电泳就没这种问题。
另外我还用过低熔点琼脂糖加琼脂糖酶消化，最后再用milipore的超滤离心管纯化一下就好了。这个过程感觉比较简单方便。
虽然最后我还是没能成功回收我的目标片段，但是也没遇到过楼主说的那种问题。会不会是你的透析带没用缓冲液充满，扎紧后有气泡或是胶没被没过啊？还有就是电泳槽里缓冲液不够？
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6楼2009-03-02 10:45:03
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