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籣103103

铜虫 (小有名气)

[交流] 你了解吗?一套中性粒细胞碱性磷酸酶染色的详细流程 已有1人参与

一、
实验原理

二、
试剂
(1)固定剂:10%甲醛甲醇溶液
(2)Tris-Hcl缓冲液的配制:Tris粉〔三胺基甲烷〕4.85克溶于200ml蒸馏水中,加浓HCL1-2滴,PH调至9.2,4℃保存!
(3)作用(基质液):
磷酸萘酚钠      5mg
N-N二甲基酰胺    1ml
Tris-Hcl液       4ml
坚固蓝RR盐       5mg
(4)复染液:1%中性红

三、
实验步骤
1、新鲜、干燥的外周血或骨髓涂片(标本片及对照片)加固定剂作用30秒(染缸),水洗待干;
2、滴加作用液,室温染色15min,水洗待干;
3、1%中性红复染1min

四
注意事项
(1) 重氮盐以坚固蓝RR盐为最佳;
(2) 坚固蓝RR盐应适量:过多易造成染色失败,过少使反应减弱;
(3) 每次都要做阳性对照;
(4) 作用液新鲜配制,配好后要立即使用

五、
结果观察
(对照片成熟中性粒细胞中出现棕黑色颗粒为阳性细胞,说明染色成功)
正常人除成熟中性粒细胞NAP可见阳性外,其它血细胞均为阴性。且正常阳性率<40%,积分值30~130分。

六、
NAP阳性结果及积分判断标准
“-”  0分,胞浆中无阳性颗粒
“+”   1分,胞浆中含有少量颗粒
“2+”  2分,胞浆中含有中等量颗粒
“3+”  3分,胞浆中含有丰富的颗粒,但胞核清楚
“4+”  4分,胞浆中含有丰富粗大的颗粒,但胞核不清楚
七、
临床意义
增高:细菌感染、类白、AA、急淋、慢粒急变、骨髓增殖性疾病,恶性淋巴瘤。
降低:慢粒、急粒、PNH、MDS、恶组

你了解吗?一套中性粒细胞碱性磷酸酶染色的详细流程
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细胞检测,蛋白检测,Western-blot,ELISA检测,PCR,基因检测,组织学检测,病毒学,微生物,动物实验等专业实验
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kata005

新虫 (初入文坛)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问下我的直接是tris-hcl粉剂,是否用蒸馏水溶解就成了Tris- hcl缓冲液,最多再用盐酸调一下PH?
2楼2017-12-24 21:50:10
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