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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 构载体时 ，菌批和质批都有条带，双酶切没有目的片段，是怎么回事？
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安尘懂起

新虫 (初入文坛)

[求助] 构载体时 ，菌批和质批都有条带，双酶切没有目的片段，是怎么回事？ 已有1人参与

构载体时 ，菌批和质批都有条带，双酶切没有目的片段，是怎么回事？

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1楼 2017-12-01 20:09:50
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kkkkk76

新虫 (小有名气)
同样会遇到这种情况，我就是测序，也没有阳性结果，最后只能重新连

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2楼2017-12-01 22:47:46
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快乐的大脚

铜虫 (初入文坛)
0不知道你做pcr的引物用的什么 联系 用载体上的一个引物 和自己基因上的一引物克隆  可以排除非质粒片段干扰 1确认条带大小 是否有误 确认酶切效率  2连接转化后多选些菌 做菌批 再酶切  3也可能由于酶切片段太小 电泳看不太出来 如果是这样 建议增加酶切模板  琼脂糖浓度加倍 跑电泳看看  4直接测序看看 理论上克隆出来了  应该问题不会太大

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3楼2017-12-02 10:06:54
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快乐的大脚

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
安尘懂起: 金币+10, ★有帮助 2017-12-02 10:36:26
引用回帖:
3楼: Originally posted by 快乐的大脚 at 2017-12-02 10:06:54
0不知道你做pcr的引物用的什么 联系 用载体上的一个引物 和自己基因上的一引物克隆  可以排除非质粒片段干扰 1确认条带大小 是否有误 确认酶切效率  2连接转化后多选些菌 做菌批 再酶切  3也可能由于酶切片段太小 电 ...

如果刚才0的方法片段能够克隆出来 且片段大小无误  基本上就是连上了  建议直接测序

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4楼2017-12-02 10:15:15
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前行的璐

新虫 (小有名气)
我也想问下，我的菌落pcr有条带，酶切有条带，但是送测序了无信号，怎么办？
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5楼2017-12-02 11:17:07
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