| 查看: 1109 | 回复: 5 | ||
yuevis铜虫 (小有名气)
|
[求助]
PCR出不来目的条带
|
|
我想overlap pcr把上下同源臂和目的基因连在一起，从基提取的细菌基因组上扩增上下同源臂，没有目的条带，有很多比目的条带小或者接近的杂带，请问这是怎么回事啊，很急啊，我的引物是这样的 F1:AACTTGTGACGGAGGCG R1:CTGACGTATAGATGACATAAGCCAGATCTGTCGCTTCGGTGC F2:GCTTGCGAGAGGTTACCTGAACCGGCCGGAGCTGAC R2:TTCCAGCGGAGTCCGA 重叠区25bp左右，primer给的Tm是52和54左右，合成单上是54和56度左右，我试了退火温度48，50，52，54，56效果都不好，杂带很多，目的条带有的没有，有的很淡。我之前想的是就算特异性不好，之后胶收就行了，现在是连条带都没有，用的是fastpfu酶，做的10微升体系。求教各位啊! 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有223人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
2楼2017-11-30 06:33:35
yuevis
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6.3
- 散金: 102
- 沙发: 1
- 帖子: 281
- 在线: 74小时
- 虫号: 4994662
- 注册: 2016-09-08
- 性别: GG
- 专业: 系统生物学
|
刚开始做，很多不懂，我想的是那10微升试条件的，体系会有很大影响吗?还有出现很多杂带是不是说明提取的基因组和体系是没问题的?一般用什么酶?实验室只有fastpfu酶 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-11-30 07:05:56
4楼2017-11-30 12:28:48
5楼2017-12-02 16:29:20
yuevis
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6.3
- 散金: 102
- 沙发: 1
- 帖子: 281
- 在线: 74小时
- 虫号: 4994662
- 注册: 2016-09-08
- 性别: GG
- 专业: 系统生物学
6楼2017-12-02 18:37:56