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挽裙雨铺

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化

目的基因连上了载体18T,然后从18T上面切下来,重新连另一个载体,做转化后p出来了目的片段的条带,但是摇菌提质粒后的大小又不对,更像是连18T这个载体的大小。

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yesucao

木虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-11-28 07:54:49
单酶切还是双酶切?连了载体后PCR验证是一方面,还可以通过酶切再验证。

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2楼2017-11-26 22:50:11
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挽裙雨铺

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yesucao at 2017-11-26 22:50:11
单酶切还是双酶切?连了载体后PCR验证是一方面,还可以通过酶切再验证。

双酶切,pcr条带大小对,但是提了重组后的质粒大小又不对了

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3楼2017-11-27 17:59:05
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yesucao

木虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-11-28 07:55:13
质粒有三种状态,不能单一凭提取质粒后电泳大小判断,建议质粒双酶切,再电泳检测判断。如果酶切后的小片段是目的条带,大片段和T载大小相同说明没连上,如果大片段和载体大小差不多证明连对了

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4楼2017-11-27 21:46:44
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