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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 转化
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挽裙雨铺

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化

目的基因连上了载体18T，然后从18T上面切下来，重新连另一个载体，做转化后p出来了目的片段的条带，但是摇菌提质粒后的大小又不对，更像是连18T这个载体的大小。

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1楼 2017-11-25 16:19:53
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yesucao

木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-11-28 07:54:49
单酶切还是双酶切？连了载体后PCR验证是一方面，还可以通过酶切再验证。

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2楼2017-11-26 22:50:11
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挽裙雨铺

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yesucao at 2017-11-26 22:50:11
单酶切还是双酶切？连了载体后PCR验证是一方面，还可以通过酶切再验证。

双酶切，pcr条带大小对，但是提了重组后的质粒大小又不对了

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3楼2017-11-27 17:59:05
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yesucao

木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-11-28 07:55:13
质粒有三种状态，不能单一凭提取质粒后电泳大小判断，建议质粒双酶切，再电泳检测判断。如果酶切后的小片段是目的条带，大片段和T载大小相同说明没连上，如果大片段和载体大小差不多证明连对了

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4楼2017-11-27 21:46:44
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