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清明河上

新虫 (小有名气)

[求助] 平板计数细菌各梯度之间不成比例? 已有3人参与

请教各位大神,最近做细菌平板计数实验,细菌长到OD600=0.6,用PBS缓冲液10倍系列梯度稀释,每个平板涂100μL,细菌生长情况如下:
   10^-9:20,22,15,18,26,14,15,18
   10^-8:56,62,65,62,69,67,64,89
   10^-7:197,217,200,165,184,256,177,155
   各平行重复性还可以接受,但是相邻的两个梯度之间的菌落数形不成10倍关系。
   这是什么原因导致的?这种结果可以采用吗?应该怎样处理,计算菌的浓度(CFU/mL)?该如何解决这个问题?
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myindexaust

铁杆木虫 (正式写手)

2楼2017-11-21 21:26:36
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jinpeng1980

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
选取30-300间的稀释度计数并乘以相应稀释倍数再乘以10为每mL样品原液中的活菌总数
如若两个稀释度均在30-300
则以其各自稀释度下计算的菌落数相除
比值小于2则 取两稀释度的平均值
如若大于2,则取稀释度小的那个计算菌落数。
同一稀释度下的3个平板取3个平板的平均值。
若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可 记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数再乘10进行计算。
若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数再乘10进行计算。
若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数再乘10进行计算。
若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU~300CFU之间,其中一部分小于30CFU或大于 300CFU时,则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数再乘10进行计算
3楼2017-11-22 08:15:31
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
手法问题,刚开始我也是这样的,稀释不到位,需要反复震荡,而且你加100ul也不对,至少500ul吧,然后涂布也是技术活,要360度无死角旋转着一遍遍涂布。尽可能的均匀,而不是倒进去就完事了。可以考虑倾注法,会准确点。
4楼2017-11-22 08:47:13
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清明河上

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jinpeng1980 at 2017-11-22 08:15:31
选取30-300间的稀释度计数并乘以相应稀释倍数再乘以10为每mL样品原液中的活菌总数
如若两个稀释度均在30-300
则以其各自稀释度下计算的菌落数相除
比值小于2则 取两稀释度的平均值
如若大于2,则取稀释度小的 ...

非常感谢。
5楼2017-11-22 09:54:19
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含笑半步颠

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jinpeng1980 at 2017-11-22 08:15:31
选取30-300间的稀释度计数并乘以相应稀释倍数再乘以10为每mL样品原液中的活菌总数
如若两个稀释度均在30-300
则以其各自稀释度下计算的菌落数相除
比值小于2则 取两稀释度的平均值
如若大于2,则取稀释度小的 ...

选取30-300间的稀释度计数并乘以相应稀释倍数再乘以10为每mL样品原液中的活菌总数?
还要乘以10的三次方吧
6楼2017-11-28 16:18:56
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jinpeng1980

捐助贵宾 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 含笑半步颠 at 2017-11-28 16:18:56
选取30-300间的稀释度计数并乘以相应稀释倍数再乘以10为每mL样品原液中的活菌总数?
还要乘以10的三次方吧...

按10倍稀释度依次稀释的啊。
7楼2017-11-30 09:46:14
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情景处理

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一眼即能看出是菜鸟。操作手法太差了,你刚接触微生物这一块。多练习就准了。
8楼2017-12-11 15:38:19
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零时差的拥有

新虫 (初入文坛)

换个人再试一次,有时候点背

发自小木虫Android客户端
9楼2017-12-21 09:16:23
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