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金小厮

新虫 (初入文坛)

[求助] 双夹心ELISA阴性对照一直高,有的达到1是怎么回事啊 已有4人参与

做了一个月了,一直阴性对照值很高。我是两个单抗夹抗原,每个组分浓度都是确定的,是之前实验室建好的体系。我刚开始做的时候是好的,最近却一直对照值很高。尝试过更换所用到的溶液(5%脱脂奶粉、3%BSA等)没有解决,现在甚至包被5%脱脂奶粉+HRP都有0.6!按理来说没有酶标二抗,hrp又会被洗脱出去,值不该这么高啊。百思不得其解。求各位大神莅临指点不胜感激!(附图是各组合所对应的 OD值)谢谢大家!

双夹心ELISA阴性对照一直高,有的达到1是怎么回事啊


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feiyue122

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

还有你的操作上估计也出现了问题,特别是洗板方面,
6楼2018-10-16 17:21:54
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是显色液的问题,显色液是自己配制的还是购买的,试试空白的板子加显色液看看信号值
2楼2017-11-21 16:05:57
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金小厮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yyy0305 at 2017-11-21 16:05:57
可能是显色液的问题,显色液是自己配制的还是购买的,试试空白的板子加显色液看看信号值

显色液是购买的,之前单独加显色液做过,结果是好的。会不会是封闭不完全或者包被不完全呢,读出的od值非常随意没有规律

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3楼2017-11-21 16:10:59
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bbcaaa888

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这种情况多数是试剂出了问题,简单的方法是从新配一下封闭液和显色液(或用新批号的试剂);
以后碰到类似问题所有试剂从新配一遍多数能解决(当然也要想想再优化一下,比如温度等环境是否变化);
4楼2017-11-22 11:51:14
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