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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 双夹心ELISA阴性对照一直高，有的达到1是怎么回事啊
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金小厮

新虫 (初入文坛)

[求助] 双夹心ELISA阴性对照一直高，有的达到1是怎么回事啊 已有4人参与

做了一个月了，一直阴性对照值很高。我是两个单抗夹抗原，每个组分浓度都是确定的，是之前实验室建好的体系。我刚开始做的时候是好的，最近却一直对照值很高。尝试过更换所用到的溶液（5%脱脂奶粉、3%BSA等）没有解决，现在甚至包被5%脱脂奶粉+HRP都有0.6！按理来说没有酶标二抗，hrp又会被洗脱出去，值不该这么高啊。百思不得其解。求各位大神莅临指点不胜感激！（附图是各组合所对应的 OD值）谢谢大家！

双夹心ELISA阴性对照一直高，有的达到1是怎么回事啊


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1楼 2017-11-21 14:12:00
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是显色液的问题，显色液是自己配制的还是购买的，试试空白的板子加显色液看看信号值
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2楼2017-11-21 16:05:57
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金小厮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yyy0305 at 2017-11-21 16:05:57
可能是显色液的问题，显色液是自己配制的还是购买的，试试空白的板子加显色液看看信号值

显色液是购买的，之前单独加显色液做过，结果是好的。会不会是封闭不完全或者包被不完全呢，读出的od值非常随意没有规律

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3楼2017-11-21 16:10:59
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bbcaaa888

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种情况多数是试剂出了问题，简单的方法是从新配一下封闭液和显色液（或用新批号的试剂）；
以后碰到类似问题所有试剂从新配一遍多数能解决（当然也要想想再优化一下，比如温度等环境是否变化）；
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4楼2017-11-22 11:51:14
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金小厮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bbcaaa888 at 2017-11-22 11:51:14
这种情况多数是试剂出了问题，简单的方法是从新配一下封闭液和显色液（或用新批号的试剂）；
以后碰到类似问题所有试剂从新配一遍多数能解决（当然也要想想再优化一下，比如温度等环境是否变化）；

正在换，谢谢建议

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5楼2017-11-22 15:30:12
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feiyue122

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

还有你的操作上估计也出现了问题，特别是洗板方面，
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6楼2018-10-16 17:21:54
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junjieshao

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
7楼2019-04-29 23:17:54
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