应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 请教：细胞免疫荧光
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2332  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xuemei1984

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽

» 猜你喜欢
1楼 2009-02-24 19:27:31
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yang0071

木虫 (职业作家)
★ ★ ★
xuemei1984(金币+1,VIP+0):谢谢！ 5-7 13:59
xuemei1984(金币+2,VIP+0):谢谢 5-21 18:12
免疫荧光
1） 处理盖玻片
将盖玻片用2 M NaOH 浸泡2h，洗净后置于70％乙醇中备用；
2） 细胞培养
从70％乙醇中取出盖玻片，晾干；将盖玻片放入6 孔板中，分适量细胞于其上，使单层细胞铺至60％培养面积；
3） 固定
弃去培养液，用PBS 洗涤盖玻片，加入2 ml 4％多聚甲醛室温静置约30 min；PBS 洗涤，10 min×3 次，缓摇（若细胞贴壁能力差，则静置洗涤，下同）；
4） 透化
吸干PBS，加入含0.2％Triton X-100、1%BSA 的PBS 约1 ml；冰上静置5 min；PBS 洗涤，10 min×3 次；
5） 封闭
吸干PBS，于六孔板相应孔中加入1 ml 含1％BSA 的PBS，室温封闭1 h；PBS 洗涤，10 min×3 次；
6） 一抗结合
一抗按适当滴度稀释在含1％BSA 的PBS 中，滴在PARAFILM 膜上；从培养孔中取出盖玻片，用吸水纸擦去背面及细胞面边缘处，细胞面朝下轻轻放在PARAFILM 膜上，与抗体均匀接触；室温，避光，静置2～3 h；
7） 二抗结合
取下盖玻片，放入细胞培养板相应孔中，PBS 洗涤，10 min×3 次；在含1％BSA 的PBS 中稀释荧光二抗至4mg/ml（约1:100），滴在PARAFILM膜上；从培养孔中取出盖玻片，用吸水纸擦去背面及细胞面边缘处，细胞面朝下轻轻放在PARAFILM 膜上，与抗体均匀接触；室温，避光，静置1～1.5 h；
8） 荧光检测
取下盖玻片，放入细胞培养板相应孔中，PBS 洗涤，10 min×3 次；取载玻片，滴少量10％甘油（约50 ul），将盖玻片细胞面朝下放在载玻片上；荧光显微镜或激光共聚焦显微镜检测相应荧光（40～100×油镜）。
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2009-05-06 13:15:42
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

verbal2005

金虫 (职业作家)
★
xuemei1984(金币+1,VIP+0):谢谢啦！ 2-25 12:52
吸净培养液，用PBS冲洗5分钟×2次 ， 之 后 加100%冰甲醇固定(每孔1000ul)，-20℃冰箱放置20分钟。采用免疫法进行细胞免疫荧光染色。操作步骤简述如下：
1．细胞以100%甲醇-20℃固定10-20分钟，用PBS冲洗2-3次，TPS/Triton100洗3次，5min/次；PBS洗5min;
2．正常山羊血清封闭液，室温封闭45-60min，PBS洗去多余液体；
3．分别滴加一抗37℃孵育2小时；
4．TPS/Triton100洗5min×3次，滴加罗丹明标记的二抗IgG，37℃1小时（闭光），PBS洗，5min×3次；
5.DAPI染核10分钟
6.PBS洗3次
7．滴加抗荧光淬灭剂封片；
8．镜检。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-02-25 09:26:04
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuemei1984

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2009-02-25 12:51:50
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

verbal2005

金虫 (职业作家)
只要不涉及透膜的冲洗都可以用PBS或者TBS冲洗
赞一下 回复此楼
4楼2009-02-25 21:23:51
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 各位老师好，我的一志愿为北京科技大学085601材料专硕 +11 Koxui 2026-03-28 11/550 2026-03-31 21:17 by yuq
[考研] 省双一流重点一本大学招收调剂 +3 wwwwffffff 2026-03-31 5/250 2026-03-31 19:49 by 曾曾曾！
[考研] 材料科学与工程339求调剂 +3 hyz0119 2026-03-31 3/150 2026-03-31 18:31 by 1939136013狗壮
[考研] 张芳铭-中国农业大学-环境工程专硕-298 +9 手机用户 2026-03-26 9/450 2026-03-31 18:09 by 544594351
[考研] 生医工0831调剂求推荐 +4 小熊睿睿_s 2026-03-27 6/300 2026-03-31 17:12 by 记事本2026
[考研] 322求调剂：一志愿湖南大学 材料与化工（085600），已过六级。 +10 XX小邓 2026-03-29 10/500 2026-03-31 16:46 by 不吃魚的貓
[考研] 考研调剂求助 +7 13287130938 2026-03-31 7/350 2026-03-31 16:39 by 690616278
[考研] 求化学调剂 +12 wulanna 2026-03-28 12/600 2026-03-31 16:38 by 690616278
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +6 Ong3 2026-03-27 6/300 2026-03-31 15:18 by yanflower7133
[考研] 英一数一总分334求调剂 +4 陈阳坤 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:22 by 记事本2026
[考研] 一志愿浙江大学工科动力工程370,数一121,专业课135，现在能去哪里 +3 080700调剂 2026-03-30 4/200 2026-03-31 12:00 by KLMY666
[考研] 一志愿中国科学院大学265求调剂 +6 恬淡ye 2026-03-31 7/350 2026-03-31 11:28 by 恬淡ye
[考研] 282求调剂 +3 呼吸都是减肥 2026-03-31 3/150 2026-03-31 10:00 by wangjy2002
[考研] 310求调剂 +10 争取九点睡 2026-03-30 10/500 2026-03-30 16:45 by ztnimte
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +4 邱gl 2026-03-26 7/350 2026-03-30 08:39 by 探123
[考研] 340求调剂 +6 Amber00 2026-03-26 6/300 2026-03-29 12:06 by 无际的草原
[考研] 086000生物与医药调剂 +5 Feisty。 2026-03-28 9/450 2026-03-29 12:02 by longlotian
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +6 崔wj 2026-03-26 6/300 2026-03-29 01:11 by hanserlol
[考研] 一志愿郑大085600，310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭