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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xuemei1984

兑换贵宾

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nursingdandan

专家顾问

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xuemei1984(金币+1,VIP+0):谢谢参与! 3-13 18:03
将神经干细胞球吸出并转移至涂有多聚赖氨酸的24孔板中,370C, 5%C02培养箱中培养2小时使细胞贴壁,吸除细胞培养液,每孔加入神经干细胞分化液0.5m1, 37℃,5%CO2培养箱中培养7天,吸除细胞分化液,0.01MPBS洗片,加4%多聚甲醛固定细胞30分钟,0.01MPBS洗片3次,加入0.1 % Triton 破膜10分钟,0.01MPBS洗片3次,加入2%BSA室温下封闭30分钟,分别加入一抗羊抗Tuj-1抗体和兔抗Vimentin抗体,于4℃过夜,0.01MPBS洗片3次,分别加荧光二抗羊抗兔IgG-Cy3,室温下避光2小时,荧光显微镜下观察。
5楼2009-03-12 12:37:25
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verbal2005

专家顾问

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xuemei1984(金币+1,VIP+0):谢谢啦! 2-25 12:52
吸净培养液,用PBS冲洗5分钟×2次 , 之 后 加100%冰甲醇固定(每孔1000ul),-20℃冰箱放置20分钟。采用免疫法进行细胞免疫荧光染色。操作步骤简述如下:
1.细胞以100%甲醇-20℃固定10-20分钟,用PBS冲洗2-3次,TPS/Triton100洗3次,5min/次;PBS洗5min;
2.正常山羊血清封闭液,室温封闭45-60min,PBS洗去多余液体;
3.分别滴加一抗37℃孵育2小时;
4.TPS/Triton100洗5min×3次,滴加罗丹明标记的二抗IgG,37℃1小时(闭光),PBS洗,5min×3次;
5.DAPI染核10分钟
6.PBS洗3次
7.滴加抗荧光淬灭剂封片;
8.镜检。
2楼2009-02-25 09:26:04
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xuemei1984

版主

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3楼2009-02-25 12:51:50
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verbal2005

主管区长

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只要不涉及透膜的冲洗都可以用PBS或者TBS冲洗
4楼2009-02-25 21:23:51
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