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superharry至尊木虫 (职业作家)
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PEG介导转化丝状真菌，基因敲除后，用什么质粒回补？
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大家好！请教一个问题。 丝状真菌被敲除基因后，想把基因回补，验证基因功能，想用PEG介导转化原生质体，构建载体的策略是：筛选标记cassette + 目的基因 cassette（目的基因自身启动子+目的基因原始DNA+自己自身的终止子），把上面的两个cassette 分布克隆到一个载体（回补载体基础框架，此载体不知道该采用什么载体？pMD18T可以吗----最终载体可能达到10000bp？双元载体可以吗----终载体可能达到14000bp？丝状真菌表达载体？如pAN7-1，请问改用什么载体框架可行？），得到回补载体，回补载体通过PEG介导转入敲除株的原生质体，请问这种策略是否可行？ 另外还有一个策略，就是把上面的两个表达框克隆到双元载体里，通过农杆菌介导转化，转入敲除株的分生孢子。 请教大家如何做比较好! 非常感谢！ |
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