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求助关于过表达overexpression的问题
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各位朋友，急求关于overexpression技术的问题。 在我设计的实验中需要使用overexpression或siRNA技术，但在实验室讨论时，师兄们说overexpression可能有负效应，最好不要使用，其说服力不如干涉。但我找不到相关的文献证实这一点，不知道大家有没有这方面的经验或者最好有相关的外文文献。拜托大家了！ [ Last edited by 350784478 on 2009-10-18 at 10:26 ] |
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aust(金币+2,VIP+0):谢谢您的意见，因为我们实验室以前有个几个研究生做了过表达，但有2个均和预期的结果相反，所以才有此一问。 2-24 17:37
aust(金币+2,VIP+0):谢谢您的意见，因为我们实验室以前有个几个研究生做了过表达，但有2个均和预期的结果相反，所以才有此一问。 2-24 17:37
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晕，随便说一句就被奖励了金币，不好意思了 多谈几句 其实不同实验室的条件不一样，所以可能过表达或者干扰的技术门槛也不大一样 我们做干扰是做得很多的，转染试剂也比较多 lipo 2000，RNAiMAX，HiPerFect，还有FuGene等的 所以对我们来说做RNA干扰是相对简单事情 而且由于RT和western也做得很多，一套流程下来，三四个星期下来，干扰模型就可以摸得很透了，然后就可以做后续的实验 还有我们这里跟锐博这个公司签了服务协议，17xx元就有一个RNAi套餐，从设计到合成，配阳性对照和阴性对照 而至于过表达，我们转质粒少一点，但是我们有一位老师有很丰富的建稳定株的经验，另外还有一个师姐做得很多，所以做过表达也是不难的，但是周期可能会相对长，因为做的人比较少。而且自己构建质粒也比较少，一般会选择跟公司买（老板跟某个公司有合作关系，他们已经克隆了很多ORF出来了）。 所以做什么的话，先选适合自己实验室风格的来做~~快速得到线索比什么都重要 至于要不要选择另外一个角度来做，就看能不能得到前期合理的结果先吧~ |
9楼2009-02-24 16:43:44
10楼2009-02-24 18:36:40