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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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36678293

铜虫 (正式写手)

[交流] 求助,关于测序引物!

我有一个基因,只知道他是用IPTG诱导表达的,但是不知道是什么载体,想给基因测序,但是不知道该用什么测序引物?麻烦大家,给点意见,T7除外!!!
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫

★ ★ ★
36678293(金币+3,VIP+0):非常感谢你的分析! 2-24 15:39
楼主你提供的条件实在太少了,但是我想有两个方法可以使用:
1 IPTG诱导需要IPTG的调控系统 乳糖操纵子 可以根据任意一个蛋白表达载体上的乳糖操纵子序列设计引物测 找一个PET质粒 看图谱上的公用区域

2 选取BamHI HindIII EcoRI 等常见的酶 对该载体进行限制性酶切 (和排Mapping差不多)然后对切下的条带亚克隆测序 测出多少是多少 有一段就行 然后根据已知序列设计引物 直到把整个质粒测通 然后上网分析一下 就知道是什么载体和上面带有什么基因了

如果楼主怕麻烦 那就直接送质粒出去 全测 送大片段样 (这个比较贵 但是多少K都能测 现在公司提供这种服务 也就是2楼ATP同学说的方法) 希望你有选择的考虑 祝好运
Bemühen Sie !
7楼2009-02-24 12:23:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


36678293(金币+1,VIP+0):不知道能不搞的定, 2-24 02:45
叫公司帮你搞定……给钱~~
2楼2009-02-23 19:44:13
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader


36678293(金币+1,VIP+0):别人为了技术保密,就什么都不告诉,只说了个表达的方法,但是我想换载体,没办法 2-24 02:44
你知道基因的序列就可以测通整个载体了,让公司利用测得的序列合成引物继续往下测,然后你用序列上网上比对,看看得出的是什么基因;如果你不知道是什么基因,而且也不知道是什么载体,我觉得就没有必要做了。。。。。。我很奇怪,你不知道什么基因,又不知道什么载体,你做实验要干什么??
会当凌绝顶,一览众山小
3楼2009-02-23 20:05:46
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wuchuqiu

铁虫 (小有名气)


36678293(金币+1,VIP+0):3q 2-25 13:52
你的基因如果知道一点序列,直接在这上面设计引物就可进行测序了,
要不你就在启动子上设计个引物(让测序公司帮你搞定也行)
你确定这个载体上有T7启动子吗
你这个给的信息也太少了
5楼2009-02-24 10:10:22
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