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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助，关于测序引物！
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【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 36678293 的 4 个金币

36678293

铜虫 (正式写手)

[交流] 求助，关于测序引物！

我有一个基因，只知道他是用IPTG诱导表达的，但是不知道是什么载体，想给基因测序，但是不知道该用什么测序引物？麻烦大家，给点意见,T7除外！！！
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1楼 2009-02-23 19:14:58
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
36678293(金币+1,VIP+0):不知道能不搞的定， 2-24 02:45
叫公司帮你搞定……给钱~~
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2楼2009-02-23 19:44:13
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
36678293(金币+1,VIP+0):别人为了技术保密，就什么都不告诉，只说了个表达的方法，但是我想换载体，没办法 2-24 02:44
你知道基因的序列就可以测通整个载体了，让公司利用测得的序列合成引物继续往下测，然后你用序列上网上比对，看看得出的是什么基因；如果你不知道是什么基因，而且也不知道是什么载体，我觉得就没有必要做了。。。。。。我很奇怪，你不知道什么基因，又不知道什么载体，你做实验要干什么？？
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会当凌绝顶，一览众山小
3楼2009-02-23 20:05:46
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36678293

铜虫 (正式写手)
自己顶起！
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4楼2009-02-24 02:46:09
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wuchuqiu

铁虫 (小有名气)
★
36678293(金币+1,VIP+0):3q 2-25 13:52
你的基因如果知道一点序列，直接在这上面设计引物就可进行测序了，
要不你就在启动子上设计个引物（让测序公司帮你搞定也行）
你确定这个载体上有T7启动子吗
你这个给的信息也太少了
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5楼2009-02-24 10:10:22
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馨er

木虫 (著名写手)

儿科主任医师
先问一下，你知道基因名字吗？
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宠辱不惊闲观庭前花开花落，去留无意漫随天外云卷云舒
6楼2009-02-24 11:24:05
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
★ ★ ★
36678293(金币+3,VIP+0):非常感谢你的分析！ 2-24 15:39
楼主你提供的条件实在太少了，但是我想有两个方法可以使用：
1 IPTG诱导需要IPTG的调控系统 乳糖操纵子 可以根据任意一个蛋白表达载体上的乳糖操纵子序列设计引物测 找一个PET质粒 看图谱上的公用区域

2 选取BamHI HindIII EcoRI 等常见的酶 对该载体进行限制性酶切 （和排Mapping差不多）然后对切下的条带亚克隆测序 测出多少是多少 有一段就行 然后根据已知序列设计引物 直到把整个质粒测通 然后上网分析一下 就知道是什么载体和上面带有什么基因了

如果楼主怕麻烦 那就直接送质粒出去 全测 送大片段样 （这个比较贵 但是多少K都能测 现在公司提供这种服务 也就是2楼ATP同学说的方法） 希望你有选择的考虑 祝好运
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Bemühen Sie !
7楼2009-02-24 12:23:44
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
补充一下 一般表达载体直接测序效果可能不如克隆载体好 表达载体最常用的就是PET 比如28a 从NdeI酶切位点前面找序列 这是每个都有的不会切掉
我想问为什么不能用T7呢
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Bemühen Sie !
8楼2009-02-24 12:27:32
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36678293

铜虫 (正式写手)
不用T7的原因是我知道，T7可以用IPTG诱导，也可以用来测序！
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9楼2009-02-24 18:59:31
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