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liuyi8203

金虫 (小有名气)

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5楼: Originally posted by abc213 at 2017-11-13 08:29:57
那10^-2是什么原因导致的,您知道吗?应该不是没混匀的问题吧,我稀释振荡时间挺长的...

涂布的时候,涂布棒没有凉就涂了,太烫了,把菌烫死了
11楼2017-11-13 10:44:06
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abc213

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by liuyi8203 at 2017-11-13 10:44:06
涂布的时候,涂布棒没有凉就涂了,太烫了,把菌烫死了...

这个问题我很注意的,我是等涂布棒完全冷却了才去涂的,是从高稀释度到低稀释度涂的,中间不更换涂布棒,应该不是涂布棒太烫的原因

发自小木虫Android客户端
12楼2017-11-13 10:50:29
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我爱我熊

铜虫 (初入文坛)

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9楼: Originally posted by abc213 at 2017-11-13 10:43:14
我是先培养一个菌落平板,划线培养24h,之后挑单菌落到5ml的无菌生理盐水里面,振荡均匀,这就是未稀释前的菌悬液,我这样操作可以吗?之后的平板我是放在4℃的冰箱里保存备用,只保存一个星期。还想问下,您是怎么 ...

一般大肠杆菌24小时单菌落应该长得很好了,一个单菌落加到5ml盐水的菌悬液会大于0.5麦氏,菌悬液制作应该没有问题。而你涂布的只有第一个稀释梯度看着比较正常。那考虑1、是不是涂布这一个步骤的问题,涂布棒是一次性的还是玻璃的。一次性的每个板子都要换一个涂布棒;如果是玻璃的则需要没次烧一下,然后等着冷却好再开始涂布
2、培养基的问题,一般都是用营养琼脂这一类基础培养基,培养基表面需要保持一定的干燥,不能太湿或者太干。
3、如果想要做一个比较准确的计数,还是需要配制麦氏比浊管。1%硫酸、1.175%氯化钡   0.5麦氏管:50微升+9950微升
4、先把菌纯化再开始实验

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

13楼2017-11-13 11:33:40
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我爱我熊

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 我爱我熊 at 2017-11-13 11:33:40
一般大肠杆菌24小时单菌落应该长得很好了,一个单菌落加到5ml盐水的菌悬液会大于0.5麦氏,菌悬液制作应该没有问题。而你涂布的只有第一个稀释梯度看着比较正常。那考虑1、是不是涂布这一个步骤的问题,涂布棒是一次 ...

50微升氯化钡+9950微升硫酸
14楼2017-11-13 11:38:09
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abc213

银虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by 我爱我熊 at 2017-11-13 11:33:40
一般大肠杆菌24小时单菌落应该长得很好了,一个单菌落加到5ml盐水的菌悬液会大于0.5麦氏,菌悬液制作应该没有问题。而你涂布的只有第一个稀释梯度看着比较正常。那考虑1、是不是涂布这一个步骤的问题,涂布棒是一次 ...

1.涂布棒是玻璃的,由于是从高稀释度到低稀释度涂的(10^-6—10^-1),所以也没有更换玻璃棒和灼烧玻璃棒,涂得时候是等涂布棒完全冷却后涂的
2.培养基之前用的就是普通的营养琼脂培养基,这次换成了胰蛋白胨大豆琼脂培养基,想看看是不是培养基对细菌菌落的影响
3.其实我主要需要的是稀释到一定程度可计数的菌落(30—300左右),具体菌落是多少个
4.纯化是不是就是对大肠杆菌不断地平板划线培养,然后挑单菌落继续培养?
15楼2017-11-13 12:37:44
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我爱我熊

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
15楼: Originally posted by abc213 at 2017-11-13 12:37:44
1.涂布棒是玻璃的,由于是从高稀释度到低稀释度涂的(10^-6—10^-1),所以也没有更换玻璃棒和灼烧玻璃棒,涂得时候是等涂布棒完全冷却后涂的
2.培养基之前用的就是普通的营养琼脂培养基,这次换成了胰蛋白胨大豆 ...

TSA其实和营养琼脂差别不大,可以试试。
30-300应该在-4次方这个稀释度左右,具体看板子结果
纯化就是划线分离出单菌落,镜检格兰染色,方便的话简单鉴定一下(IMVC)。靛基质阳性,甲基红阳性,VP阴性,柠檬酸盐阴性

额。。。其实,你应该重复一下你的实验,说不定就结果就正常了,也许就不用分析这么多原因了
16楼2017-11-13 13:19:25
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abc213

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 我爱我熊 at 2017-11-13 13:19:25
TSA其实和营养琼脂差别不大,可以试试。
30-300应该在-4次方这个稀释度左右,具体看板子结果
纯化就是划线分离出单菌落,镜检格兰染色,方便的话简单鉴定一下(IMVC)。靛基质阳性,甲基红阳性,VP阴性,柠檬酸盐 ...

好的,谢谢了
17楼2017-11-13 14:23:44
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gufanzhch

铁虫 (初入文坛)

大肠杆菌不会这么大,杂菌污染了;

发自小木虫Android客户端
18楼2017-11-22 15:49:52
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mayfun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我以前也遇到过这种情况,不知道你加了多少体积的菌液涂板?看图片推测你的初始菌液浓度只有10的4次方左右。如果浓度有10的8次方,那么稀释10倍的那个板子上的细菌是连成片长的,根本数不了的。建议你用0.5麦氏浊度(对应浓度为0.5*10的8次方的菌液)的比色管和你的菌液对比,看浊度是不是和他差不多。或者你可以测下吸光度,10的8次方浓度的细菌OD600的值有1.0左右。
19楼2017-11-24 15:22:36
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ganfighter

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by abc213 at 2017-11-13 08:29:57
那10^-2是什么原因导致的,您知道吗?应该不是没混匀的问题吧,我稀释振荡时间挺长的...

你留意一下你的涂布棒,可能是因为没有等到它的温度降下来就看是涂了,导致高温杀死了大量细菌,从而导致2号板的结果。
20楼2018-04-16 17:04:39
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