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yoyoisagirl

新虫 (初入文坛)

[求助] 为啥我的酶液做WB有条带,但是镍柱纯化时挂不上柱啊

各位大神,本人第一次做蛋白纯化,保险起见先做了WB,确定是有条带的,说明是标签是连上去的啊,为啥用镍柱纯化的时候挂不上柱子啊?做了好几次了都一样的!我的结合缓冲液是20mM PBS+0.5M NaCl洗脱缓冲液是结合缓冲液基础上加0.5M咪唑!用的线性洗脱,可是没有看到有峰洗下来啊,要哭了

为啥我的酶液做WB有条带,但是镍柱纯化时挂不上柱啊


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314300420

捐助贵宾 (著名写手)

His不挂柱不少见,通常理解为标签被包裹在空间结构内,没有暴露出来。做WB的时候,样品是经过变性处理的,打破了空间构像,所以可以被检测出来

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6楼2017-11-11 18:53:52
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Vet is king

新虫 (文坛精英)

这个咱俩可以交流一下,纯化一直没有

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2楼2017-11-11 16:05:59
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yoyoisagirl

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Vet is king at 2017-11-11 16:05:59
这个咱俩可以交流一下,纯化一直没有

你的情况跟我一样吗?

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3楼2017-11-11 16:18:49
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ivirus

金虫 (正式写手)

结合缓冲液用500mM咪唑。。太高了吧

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奔三的年纪 想换个环境
4楼2017-11-11 17:37:53
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