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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 为啥我的酶液做WB有条带，但是镍柱纯化时挂不上柱啊
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yoyoisagirl

新虫 (初入文坛)

[求助] 为啥我的酶液做WB有条带，但是镍柱纯化时挂不上柱啊

各位大神，本人第一次做蛋白纯化，保险起见先做了WB，确定是有条带的，说明是标签是连上去的啊，为啥用镍柱纯化的时候挂不上柱子啊？做了好几次了都一样的！我的结合缓冲液是20mM PBS+0.5M NaCl洗脱缓冲液是结合缓冲液基础上加0.5M咪唑！用的线性洗脱，可是没有看到有峰洗下来啊，要哭了

为啥我的酶液做WB有条带，但是镍柱纯化时挂不上柱啊


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1楼 2017-11-11 15:27:54
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Vet is king

新虫 (文坛精英)
这个咱俩可以交流一下，纯化一直没有

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2楼2017-11-11 16:05:59
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yoyoisagirl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Vet is king at 2017-11-11 16:05:59
这个咱俩可以交流一下，纯化一直没有

你的情况跟我一样吗？

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3楼2017-11-11 16:18:49
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ivirus

金虫 (正式写手)
结合缓冲液用500mM咪唑。。太高了吧

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奔三的年纪 想换个环境
4楼2017-11-11 17:37:53
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ivirus

金虫 (正式写手)
不好意思看错了

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奔三的年纪 想换个环境
5楼2017-11-11 17:40:05
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)
His不挂柱不少见，通常理解为标签被包裹在空间结构内，没有暴露出来。做WB的时候，样品是经过变性处理的，打破了空间构像，所以可以被检测出来

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6楼2017-11-11 18:53:52
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