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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 碱法提取质粒怎么除去细菌基因组DNA的？
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 碱法提取质粒怎么除去细菌基因组DNA的？

请教各位虫友，在用碱法提取质粒的过程中，细菌的基因组DNA是怎么除去的？怎么保证提取出来的就是质粒，而没有细菌基因组DNA?
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一个人可以不成功，但不可以不成长！
1楼 2009-02-23 14:47:18
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
基因组DNA在溶液II强碱环境下，变性，双链打开，容易和蛋白缠绕在一起，而质粒是环状的，相对稳定
加溶液III，pH恢复，环状质粒复性，而长长的基因组DNA难以及时完全复性，却被SDS（嵌入蛋白，DNA也缠绕着蛋白）和K的化合物一起给拉下来，形成难溶沉淀
所以加溶液III要很小心摇匀（小心基因组DNA断，断了就很难跟蛋白缠绕了），而且要快速混匀（快速恢复pH，而不能慢慢来，否则基因组DNA也会慢慢复性），就是这个道理
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2楼2009-02-23 15:23:11
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)
谢谢楼上的仁兄！
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一个人可以不成功，但不可以不成长！
3楼2009-02-24 10:52:22
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