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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 碱法提取质粒怎么除去细菌基因组DNA的?

请教各位虫友,在用碱法提取质粒的过程中,细菌的基因组DNA是怎么除去的?怎么保证提取出来的就是质粒,而没有细菌基因组DNA?
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一个人可以不成功,但不可以不成长!
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

基因组DNA在溶液II强碱环境下,变性,双链打开,容易和蛋白缠绕在一起,而质粒是环状的,相对稳定
加溶液III,pH恢复,环状质粒复性,而长长的基因组DNA难以及时完全复性,却被SDS(嵌入蛋白,DNA也缠绕着蛋白)和K的化合物一起给拉下来,形成难溶沉淀
所以加溶液III要很小心摇匀(小心基因组DNA断,断了就很难跟蛋白缠绕了),而且要快速混匀(快速恢复pH,而不能慢慢来,否则基因组DNA也会慢慢复性),就是这个道理
2楼2009-02-23 15:23:11
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

谢谢楼上的仁兄!
一个人可以不成功,但不可以不成长!
3楼2009-02-24 10:52:22
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