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sheng_1210

新虫 (小有名气)

[求助] PCR模版

我想克隆一个转录因子,但是提RNA反转录之后一直效果不太好,试了各种温度都是没有带,或者条带大小不对,在数据库上看到这段转录因子是没有内含子的,我是否可以用DNA来当作模版进行PCR呢?

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jayven

铁杆木虫 (著名写手)

设置阳性对照,看你pcr技术过关不

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2楼2017-11-08 22:01:38
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jayven at 2017-11-08 22:01:38
设置阳性对照,看你pcr技术过关不

应该是没什么问题的,因为做过很多次了

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3楼2017-11-08 22:11:47
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

样品是什么?提取用的什么试剂盒?RNA跑胶结果怎么样?

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4楼2017-11-08 22:13:47
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

样品是玉米,用的一个公司给的试用装,rna跑胶结果还不错,问了之前提过的同学说我的条带还可以,18s,28s,5s都有

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5楼2017-11-08 22:37:21
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 渊博震天 at 2017-11-08 22:13:47
样品是什么?提取用的什么试剂盒?RNA跑胶结果怎么样?

样品是玉米,用的一个公司给的试用装,rna跑胶结果还不错,问了之前提过的同学说我的条带还可以,18s,28s,5s都有

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6楼2017-11-08 22:37:48
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

引用回帖:
6楼: Originally posted by sheng_1210 at 2017-11-08 22:37:48
样品是玉米,用的一个公司给的试用装,rna跑胶结果还不错,问了之前提过的同学说我的条带还可以,18s,28s,5s都有
...

估计还是反转录那里的问题

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7楼2017-11-08 23:23:14
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 渊博震天 at 2017-11-08 23:23:14
估计还是反转录那里的问题
...

那我用DNA当模版可以吗?

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8楼2017-11-09 12:42:16
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

引用回帖:
8楼: Originally posted by sheng_1210 at 2017-11-09 12:42:16
那我用DNA当模版可以吗?
...

我建议还是提取RNA去反转录后在PCR,当然直接提取DNA去PCR也可以试试
9楼2017-11-09 12:47:44
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 渊博震天 at 2017-11-09 12:47:44
我建议还是提取RNA去反转录后在PCR,当然直接提取DNA去PCR也可以试试...

我用不同温度做了梯度pcr,最后dna有p出来带,但是cdna还是没有p出来,哎

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10楼2017-11-09 13:32:53
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