24小时热门版块排行榜    

查看: 1301  |  回复: 13

sheng_1210

新虫 (小有名气)

[求助] PCR模版

我想克隆一个转录因子,但是提RNA反转录之后一直效果不太好,试了各种温度都是没有带,或者条带大小不对,在数据库上看到这段转录因子是没有内含子的,我是否可以用DNA来当作模版进行PCR呢?

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jayven

铁杆木虫 (著名写手)

设置阳性对照,看你pcr技术过关不

发自小木虫Android客户端
2楼2017-11-08 22:01:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sheng_1210

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jayven at 2017-11-08 22:01:38
设置阳性对照,看你pcr技术过关不

应该是没什么问题的,因为做过很多次了

发自小木虫IOS客户端
3楼2017-11-08 22:11:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

样品是什么?提取用的什么试剂盒?RNA跑胶结果怎么样?

发自小木虫Android客户端
4楼2017-11-08 22:13:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sheng_1210

新虫 (小有名气)

样品是玉米,用的一个公司给的试用装,rna跑胶结果还不错,问了之前提过的同学说我的条带还可以,18s,28s,5s都有

发自小木虫IOS客户端
5楼2017-11-08 22:37:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sheng_1210

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 渊博震天 at 2017-11-08 22:13:47
样品是什么?提取用的什么试剂盒?RNA跑胶结果怎么样?

样品是玉米,用的一个公司给的试用装,rna跑胶结果还不错,问了之前提过的同学说我的条带还可以,18s,28s,5s都有

发自小木虫IOS客户端
6楼2017-11-08 22:37:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

引用回帖:
6楼: Originally posted by sheng_1210 at 2017-11-08 22:37:48
样品是玉米,用的一个公司给的试用装,rna跑胶结果还不错,问了之前提过的同学说我的条带还可以,18s,28s,5s都有
...

估计还是反转录那里的问题

发自小木虫Android客户端
7楼2017-11-08 23:23:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sheng_1210

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 渊博震天 at 2017-11-08 23:23:14
估计还是反转录那里的问题
...

那我用DNA当模版可以吗?

发自小木虫IOS客户端
8楼2017-11-09 12:42:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

引用回帖:
8楼: Originally posted by sheng_1210 at 2017-11-09 12:42:16
那我用DNA当模版可以吗?
...

我建议还是提取RNA去反转录后在PCR,当然直接提取DNA去PCR也可以试试
9楼2017-11-09 12:47:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sheng_1210

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 渊博震天 at 2017-11-09 12:47:44
我建议还是提取RNA去反转录后在PCR,当然直接提取DNA去PCR也可以试试...

我用不同温度做了梯度pcr,最后dna有p出来带,但是cdna还是没有p出来,哎

发自小木虫IOS客户端
10楼2017-11-09 13:32:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sheng_1210 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 19:50 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 18/900 2026-11-01 16:48 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 14/700 2026-11-01 16:45 by BCdvBAEpt3zm
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 16:45 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 15:04 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 6/300 2026-11-01 15:01 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 10/500 2026-11-01 14:50 by BCdvBAEpt3zm
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 14:48 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 14/700 2026-11-01 14:24 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 越来越担心硕士毕业后没有竞争力了 +9 zuesli 2026-10-27 15/750 2026-11-01 12:59 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 7/350 2026-11-01 12:40 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 12:38 by BCdvBAEpt3zm
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 4/200 2026-11-01 12:38 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 7/350 2026-11-01 12:27 by BCdvBAEpt3zm
[教师之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 15/750 2026-11-01 12:11 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 11:14 by BCdvBAEpt3zm
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 26/1300 2026-11-01 10:22 by BCdvBAEpt3zm
[博后之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-01 05:22 by YXM1FDCSE8Bn
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 03:59 by YXM1FDCSE8Bn
[考博] 2027博士申请-临床检验诊断学、病原生物学、微生物方向 50+3 yyh@ 2026-10-28 4/200 2026-10-31 12:47 by 可淡不可忘
信息提示
请填处理意见