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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

[求助] PCR模版

我想克隆一个转录因子，但是提RNA反转录之后一直效果不太好，试了各种温度都是没有带，或者条带大小不对，在数据库上看到这段转录因子是没有内含子的，我是否可以用DNA来当作模版进行PCR呢？

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1楼 2017-11-08 21:13:29
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jayven

铁杆木虫 (著名写手)
设置阳性对照，看你pcr技术过关不

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2楼2017-11-08 22:01:38
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sheng_1210

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by jayven at 2017-11-08 22:01:38
设置阳性对照，看你pcr技术过关不

应该是没什么问题的，因为做过很多次了

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3楼2017-11-08 22:11:47
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渊博震天

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Yeast Display

优秀版主优秀版主
样品是什么？提取用的什么试剂盒？RNA跑胶结果怎么样？

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4楼2017-11-08 22:13:47
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sheng_1210

新虫 (小有名气)
样品是玉米，用的一个公司给的试用装，rna跑胶结果还不错，问了之前提过的同学说我的条带还可以，18s，28s，5s都有

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5楼2017-11-08 22:37:21
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sheng_1210

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4楼: Originally posted by 渊博震天 at 2017-11-08 22:13:47
样品是什么？提取用的什么试剂盒？RNA跑胶结果怎么样？

样品是玉米，用的一个公司给的试用装，rna跑胶结果还不错，问了之前提过的同学说我的条带还可以，18s，28s，5s都有

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6楼2017-11-08 22:37:48
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

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6楼: Originally posted by sheng_1210 at 2017-11-08 22:37:48
样品是玉米，用的一个公司给的试用装，rna跑胶结果还不错，问了之前提过的同学说我的条带还可以，18s，28s，5s都有
...

估计还是反转录那里的问题

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7楼2017-11-08 23:23:14
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sheng_1210

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 渊博震天 at 2017-11-08 23:23:14
估计还是反转录那里的问题
...

那我用DNA当模版可以吗？

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8楼2017-11-09 12:42:16
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

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8楼: Originally posted by sheng_1210 at 2017-11-09 12:42:16
那我用DNA当模版可以吗？
...

我建议还是提取RNA去反转录后在PCR，当然直接提取DNA去PCR也可以试试
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9楼2017-11-09 12:47:44
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sheng_1210

新虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by 渊博震天 at 2017-11-09 12:47:44
我建议还是提取RNA去反转录后在PCR，当然直接提取DNA去PCR也可以试试...

我用不同温度做了梯度pcr，最后dna有p出来带，但是cdna还是没有p出来，哎

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10楼2017-11-09 13:32:53
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