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胰腺组织免疫荧光染色 已有1人参与
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各位大神急求, 小弟做的是胰腺组织胰岛素的免疫荧光染色,组织是新鲜取材的胰腺立马拿去病理科做冰冻切片,风干后,冷丙酮4℃固定15min,自然晾干,TBS洗3遍,每次5min,0.4%Tritin(新鲜配置)10min,TBS洗3遍,2%BSA作用30min,甩干不洗,滴加兔抗小鼠一抗(做免疫组化能出结果),4℃过夜,37℃复温30min,TBS3遍,滴加SANTA鼠抗兔荧光二抗,37摄氏度1h,TBS洗三遍,显微镜下观察拍照。结果如下:有特异性抗原的地方反而没有荧光结合。其余非特异性结合很强,小弟已经做过很多遍了,一抗浓度也摸索过了,现在已经是没辙了,由于面临毕业,心急万分,请各位大神老师不吝赐教。 |
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