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[求助]
胰腺组织免疫荧光染色 已有1人参与
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各位大神急求， 小弟做的是胰腺组织胰岛素的免疫荧光染色，组织是新鲜取材的胰腺立马拿去病理科做冰冻切片，风干后，冷丙酮4℃固定15min，自然晾干，TBS洗3遍，每次5min，0.4％Tritin（新鲜配置）10min，TBS洗3遍，2％BSA作用30min，甩干不洗，滴加兔抗小鼠一抗（做免疫组化能出结果），4℃过夜，37℃复温30min，TBS3遍，滴加SANTA鼠抗兔荧光二抗，37摄氏度1h，TBS洗三遍，显微镜下观察拍照。结果如下：有特异性抗原的地方反而没有荧光结合。其余非特异性结合很强，小弟已经做过很多遍了，一抗浓度也摸索过了，现在已经是没辙了，由于面临毕业，心急万分，请各位大神老师不吝赐教。 |
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