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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 有关逆转录酶对PCR抑制的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xiaoxia110

木虫 (正式写手)

[求助] 有关逆转录酶对PCR抑制的问题 已有1人参与

本人是做荧光定量PCR检测方面的，简单的说，就是将提取好的RNA，采用一步法扩增，即在一个反应液中，加入混合酶（逆转录酶和taq酶），最后观察荧光曲线看扩增的情况。
       最近遇到一个现象，检测低浓度样本的峰形很差，但是增加Taq酶量（增加到原来的5倍左右），即在25ul的反应体系中，加入了5ul的Taq酶，低浓度的峰形就变的很挺，具体见下图

       现在的问题：
              ① 混合酶的活性是没有问题的，检测其他mRNA都是正常的，会不会存在该逆转录酶（SuperscriptIII）与该核酸及Taq酶形成复合物，导致PCR不能进行？或者影响Taq酶切割探针的活性，导致峰形变差？

有关逆转录酶对PCR抑制的问题
图像 2.png
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1楼 2017-11-02 11:21:32
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-11-04 09:41:16
xiaoxia110: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2017-12-11 11:27:39
确实存在抑制，且灭活的mmlv依然会抑制，详见Qiagen的专利US 6300069 B1，以及《分子克隆》第4版
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核酸提取与Taqman诊断
3楼2017-11-03 21:54:38
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
逆转录酶在高温条件下就失活了。
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2楼2017-11-02 15:36:15
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xiaoxia110

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 山舞银蛇 at 2017-11-03 21:54:38
确实存在抑制，且灭活的mmlv依然会抑制，详见Qiagen的专利US 6300069 B1，以及《分子克隆》第4版

多谢你的回答，关于这个Qiagen的专利US 6300069 B1，你有没有全文版，我搜了下，未搜到相关信息。你有的话，能否发我下，谢谢！
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4楼2017-12-11 10:19:47
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xiaoxia110

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 山舞银蛇 at 2017-11-03 21:54:38
确实存在抑制，且灭活的mmlv依然会抑制，详见Qiagen的专利US 6300069 B1，以及《分子克隆》第4版

专利后来已搜到，想请问下你有没有《分子克隆》第4版的电子版？有的话，能否发我下，谢谢！
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5楼2017-12-11 11:27:30
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