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xiaoxia110木虫 (正式写手)
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有关逆转录酶对PCR抑制的问题已有1人参与
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本人是做荧光定量PCR检测方面的，简单的说，就是将提取好的RNA，采用一步法扩增，即在一个反应液中，加入混合酶（逆转录酶和taq酶），最后观察荧光曲线看扩增的情况。 最近遇到一个现象，检测低浓度样本的峰形很差，但是增加Taq酶量（增加到原来的5倍左右），即在25ul的反应体系中，加入了5ul的Taq酶，低浓度的峰形就变的很挺，具体见下图 现在的问题： ① 混合酶的活性是没有问题的，检测其他mRNA都是正常的，会不会存在该逆转录酶（SuperscriptIII）与该核酸及Taq酶形成复合物，导致PCR不能进行？或者影响Taq酶切割探针的活性，导致峰形变差？  图像 2.png |
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