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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Taq 酶忠实性怎么样？
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peizhilee

金虫 (小有名气)

[交流] Taq 酶忠实性怎么样？

最近实验室的超保真酶用完了，想用Taq 酶来扩增目的基因，做后面的构建，不知道Taq 酶忠实性怎么样？
我的目的基因长506bp，如果用Taq 酶来扩增会不会出现错配，错配的几率有多大？
请各位给个指点。谢谢
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一念成魔，一念成佛
1楼 2009-02-21 20:53:03
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
sxdxrhyy(金币+1,VIP+0):谢谢参与！ 2-22 09:00
会，以30个循环算，估计会有接近一半（经验值……）克隆出现点突变
但循环数降下来就好很多
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2楼2009-02-21 21:02:47
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peizhilee

金虫 (小有名气)
有一半啊，那还是几率比较大，做后面的构建还是有很大问题！谢谢楼上！
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一念成魔，一念成佛
3楼2009-02-21 21:37:46
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢参与！ 2-22 09:00
500bp使用普通Taq酶即可 通常每1kb有错1个 500的运气好可以拿到全对的克隆 建议你多挑几个送去测序 我一般p高GC的 普通GC比DNA应该更好P对
高保真酶不是很贵 楼主为什么不订了？ Primer Star和PyroBest都是 1K/min 这两个快PFU 0.5k/min Takara的比较好 普Taq买鼎国的比较好
小妹功力尚浅 回答不甚周全
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4楼2009-02-21 21:38:45
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
sxdxrhyy(金币+1,VIP+0):谢谢参与！ 2-22 09:01
==b
其实我也不用高保真酶呢，也是挑多几个克隆去测序
可能是我上次RP不好，挑了4个才中了2……
PS：对takara的酶……我个人比较无语比较不推荐~~
批次不同质量可以差很远
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5楼2009-02-21 21:46:43
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
楼主不要误会 楼上的朋友说一半应该是所有扩增条带有一半物质的量的DNA有点突变 不是500个错250个的意思 买北京鼎国的 把时间缩短一点 72度30s就行 等度p28-30轮 挑2-5个单克隆测序
如果做同源重组敲除最好用高保真 除非你的基因很大 同源臂包在内部 避免极性效应 异源表达还可以接受 表达蛋白还是保真的好 要是筛晶体那先p了看表达情况再说 先不用测序 可溶了再测 不知你PCR的目的是什么
另外 高保真酶的条件和Taq p同一个东西也是温度不一样的 不完全等同 建议重新尝试条件 原来高保真的条件换Taq p出来p不出来都正常
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6楼2009-02-21 21:46:54
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
Taq不要用Takara的 Primerstar还可以 不过也有错的 Taq北京鼎国的最好
Takara是大连的 发货我这边是上海 广州我不知道 是不是有其他的问题
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7楼2009-02-21 21:48:49
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yumo

新虫 (小有名气)
Taq酶有1/1000的出错率，要保证其忠实性，循环次数应控制在保证进行指数增长之内，否则出错率会升高。
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8楼2009-02-21 22:44:21
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muchong5577

金虫 (正式写手)
才506bp  随便什么酶都可以，但如果是高GC，用La-Taq比较好。
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9楼2009-02-22 00:18:50
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