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peizhilee

金虫 (小有名气)

[交流] Taq 酶忠实性怎么样?

最近实验室的超保真酶用完了,想用Taq 酶来扩增目的基因,做后面的构建,不知道Taq 酶忠实性怎么样?
我的目的基因长506bp,如果用Taq 酶来扩增会不会出现错配,错配的几率有多大?
请各位给个指点。谢谢
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一念成魔,一念成佛
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫

楼主不要误会 楼上的朋友说一半应该是所有扩增条带有一半物质的量的DNA有点突变 不是500个错250个的意思 买北京鼎国的 把时间缩短一点 72度30s就行 等度p28-30轮 挑2-5个单克隆测序
如果做同源重组敲除最好用高保真 除非你的基因很大 同源臂包在内部 避免极性效应 异源表达还可以接受 表达蛋白还是保真的好 要是筛晶体那先p了看表达情况再说 先不用测序 可溶了再测 不知你PCR的目的是什么
另外 高保真酶的条件和Taq p同一个东西也是温度不一样的 不完全等同 建议重新尝试条件 原来高保真的条件换Taq p出来p不出来都正常
Bemühen Sie !
6楼2009-02-21 21:46:54
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


sxdxrhyy(金币+1,VIP+0):谢谢参与! 2-22 09:00
会,以30个循环算,估计会有接近一半(经验值……)克隆出现点突变
但循环数降下来就好很多
2楼2009-02-21 21:02:47
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peizhilee

金虫 (小有名气)

有一半啊,那还是几率比较大,做后面的构建还是有很大问题!谢谢楼上!
一念成魔,一念成佛
3楼2009-02-21 21:37:46
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢参与! 2-22 09:00
500bp使用普通Taq酶即可 通常每1kb有错1个 500的运气好可以拿到全对的克隆 建议你多挑几个送去测序 我一般p高GC的 普通GC比DNA应该更好P对
高保真酶不是很贵 楼主为什么不订了? Primer Star和PyroBest都是 1K/min 这两个快PFU 0.5k/min Takara的比较好 普Taq买鼎国的比较好
小妹功力尚浅 回答不甚周全
Bemühen Sie !
4楼2009-02-21 21:38:45
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