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文吃鱼奔奔

新虫 (初入文坛)

[求助] 定点饱和突变实验流程及试剂盒求助

大佬们好。
现在我手里有一个插入了目的基因的质粒，在目的基因上我想做三个氨基酸位点的饱和突变，这三个位点离得有点远。我之前没有做过PCR，想问问大佬们引物怎么设计，以及实验protocol。
另外，做定点饱和突变可以用试剂盒吗？可以的话希望大佬们能给推荐一些试剂盒。
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1楼 2017-10-27 16:27:26
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-10-29 08:40:27
需要设计4对引物，进行3个片段的overlap pcr。如果从来没做过PCR的话，会比较麻烦。有些细节不是打字能说的明白的，最好抓一个会做pcr的师兄师姐，带你一起做一下，会好很多。或者丢给我做。。呵呵
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2楼2017-10-28 16:23:19
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)
需要设计4对引物，进行3个片段的overlap pcr。如果从来没做过PCR的话，会比较麻烦。有些细节不是打字能说的明白的，最好抓一个会做pcr的师兄师姐，带你一起做一下，会好很多。或者丢给我做。。呵呵
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3楼2017-10-29 07:39:17
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文吃鱼奔奔

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2017-10-28 16:23:19
需要设计4对引物，进行3个片段的overlap pcr。如果从来没做过PCR的话，会比较麻烦。有些细节不是打字能说的明白的，最好抓一个会做pcr的师兄师姐，带你一起做一下，会好很多。或者丢给我做。。呵呵

请问是要分别P出四个片段，再用重叠延伸PCR把它们连起来吗？
饱和突变要用的兼并引物，设计中突变位点用NNN表示，然后给公司合成就可以是吗？
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4楼2017-10-30 16:27:53
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 文吃鱼奔奔 at 2017-10-30 16:27:53
请问是要分别P出四个片段，再用重叠延伸PCR把它们连起来吗？
饱和突变要用的兼并引物，设计中突变位点用NNN表示，然后给公司合成就可以是吗？...

额，没仔细看题目，饱和突变我没做过，不太了解。。不好意思。。
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5楼2017-10-30 19:16:20
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