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文吃鱼奔奔

新虫 (初入文坛)

[求助] 定点饱和突变实验流程及试剂盒求助

大佬们好。
现在我手里有一个插入了目的基因的质粒,在目的基因上我想做三个氨基酸位点的饱和突变,这三个位点离得有点远。我之前没有做过PCR,想问问大佬们引物怎么设计,以及实验protocol。
另外,做定点饱和突变可以用试剂盒吗?可以的话希望大佬们能给推荐一些试剂盒。
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

需要设计4对引物,进行3个片段的overlap pcr。如果从来没做过PCR的话,会比较麻烦。有些细节不是打字能说的明白的,最好抓一个会做pcr的师兄师姐,带你一起做一下,会好很多。或者丢给我做。。呵呵
3楼2017-10-29 07:39:17
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-10-29 08:40:27
需要设计4对引物,进行3个片段的overlap pcr。如果从来没做过PCR的话,会比较麻烦。有些细节不是打字能说的明白的,最好抓一个会做pcr的师兄师姐,带你一起做一下,会好很多。或者丢给我做。。呵呵
2楼2017-10-28 16:23:19
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文吃鱼奔奔

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2017-10-28 16:23:19
需要设计4对引物,进行3个片段的overlap pcr。如果从来没做过PCR的话,会比较麻烦。有些细节不是打字能说的明白的,最好抓一个会做pcr的师兄师姐,带你一起做一下,会好很多。或者丢给我做。。呵呵

请问是要分别P出四个片段,再用重叠延伸PCR把它们连起来吗?
饱和突变要用的兼并引物,设计中突变位点用NNN表示,然后给公司合成就可以是吗?
4楼2017-10-30 16:27:53
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 文吃鱼奔奔 at 2017-10-30 16:27:53
请问是要分别P出四个片段,再用重叠延伸PCR把它们连起来吗?
饱和突变要用的兼并引物,设计中突变位点用NNN表示,然后给公司合成就可以是吗?...

额,没仔细看题目,饱和突变我没做过,不太了解。。不好意思。。
5楼2017-10-30 19:16:20
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