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changlinxy

铜虫 (初入文坛)

[求助] 异源基因拟南芥互补做荧光定量PCR 已有1人参与

各位大神,我最近遇到一个很尴尬的问题,拟南芥某个基因的突变体,用了其他物种这个基因的同源基因来互补,互补之后要做real time看表达。但是想到拟南芥野生型这个基因和其他物种中用来互补的基因只是同源基因并不是一样的,这样野生型能做对照么?怎么做?这个相对定量还能做不?感觉很纠结,希望大神能帮我一把,或者有看到这方面文献的希望推荐一下,急求,跪谢!!!
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ibelieveicanfly
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didongwei

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个一般是用空载体的转基因植株做副对照,然后,你的转基因材料也要多几个表达系……

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不是优秀,而是不可替代
2楼2017-10-25 12:29:55
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changlinxy

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by didongwei at 2017-10-25 12:29:55
这个一般是用空载体的转基因植株做副对照,然后,你的转基因材料也要多几个表达系……

空载体和野生型都有,但是问题是能不能用它们作对照?因为基因是不一样的,野生型里是拟南芥本身的基因,空载体转的是突变体,没有这个基因,转基因转的是外源的同源基因
ibelieveicanfly
3楼2017-10-25 14:20:28
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didongwei

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by changlinxy at 2017-10-25 14:20:28
空载体和野生型都有,但是问题是能不能用它们作对照?因为基因是不一样的,野生型里是拟南芥本身的基因,空载体转的是突变体,没有这个基因,转基因转的是外源的同源基因...

这个没问题的,而且也只能这么做

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不是优秀,而是不可替代
4楼2017-10-25 14:22:49
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changlinxy

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by didongwei at 2017-10-25 14:22:49
这个没问题的,而且也只能这么做
...

好的,那就是用野生型和空载体做正副对照?野生型的话是要用另一对引物扩拟南芥本来那个基因么?您是否看过类似的文献?我没有找到,如果能推荐两篇的话十分感谢!
ibelieveicanfly
5楼2017-10-25 17:26:23
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changlinxy

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by didongwei at 2017-10-25 14:22:49
这个没问题的,而且也只能这么做
...

好的,那就是用野生型和空载体做正副对照?野生型的话是要用另一对引物扩拟南芥本来那个基因么?您是否看过类似的文献?我没有找到,如果能推荐两篇的话十分感谢!
ibelieveicanfly
6楼2017-10-25 17:27:31
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changlinxy

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by didongwei at 2017-10-25 14:22:49
这个没问题的,而且也只能这么做
...

好的,那就是用野生型和空载体做正副对照?野生型的话是要用另一对引物扩拟南芥本来那个基因么?您是否看过类似的文献?我没有找到,如果能推荐两篇的话十分感谢!
ibelieveicanfly
7楼2017-10-25 17:27:45
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didongwei

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by changlinxy at 2017-10-25 17:27:31
好的,那就是用野生型和空载体做正副对照?野生型的话是要用另一对引物扩拟南芥本来那个基因么?您是否看过类似的文献?我没有找到,如果能推荐两篇的话十分感谢!...

你看一些前两年水稻的文章,都是这么做的。都是水稻基因转入拟南芥同源基因突变体中验证功能……

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不是优秀,而是不可替代
8楼2017-10-25 18:42:55
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