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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教大肠杆菌耐受氯霉素实验的问题
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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士

[交流] 请教大肠杆菌耐受氯霉素实验的问题

各位老师，向大家请教一个关于大肠杆菌耐受氯霉素实验的问题
我用的菌株是DH5-a，做耐受实验的时候，是用20mL的LB培养基平板划线培养，培养基的氯霉素浓度分别是：
1，12.5ug/mL  2,15ug/mL  3,17.5ug/mL  4,20ug/mL  5,22.5ug/mL  6,25ug/mL
氯霉素是先溶成12500ug/mL的溶液在倒平板的时候加进去的，然后摇匀

实验结果，1，2两个浓度比较低的平板没有菌体生长，相反3，4，5，6三个氯霉素浓度比较大的平板反而生长的很好

请问各位老师，是什么原因造成这种现象呢？常理应该是浓度越大越不易生长的啊！

我们实验室是以发酵为主，做大肠杆菌实验是第一次，话题有些小儿科，但是还是希望各位老师耐心解答，非常感谢！
祝各位老师牛年大顺~！

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-18 at 10:29 ]
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不孝有三，读博为大！
1楼 2009-02-20 09:45:14
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fraser

银虫 (正式写手)
★ ★
yidaqunyan(金币+1,VIP+0):谢谢老师第一个给我回答，金币有限不成敬意~ 2-20 11:23
yidaqunyan(金币+1,VIP+0):谢谢关注 2-21 23:53
重新做一次，控制好温度，氯霉素加入培养基时的温度要适当！
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2楼2009-02-20 11:03:59
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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士
引用回帖:
Originally posted by fraser at 2009-2-20 11:03:
重新做一次，控制好温度，氯霉素加入培养基时的温度要适当！

我当时是把培养基晾到60度时倒得平板，在倒平板之后往平板里加的 氯霉素

我想请问老师，培养基多少度比较合适呢？大肠杆菌耐受氯霉素的浓度大概是多少呢？
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不孝有三，读博为大！
3楼2009-02-20 11:20:44
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Lixiaolang

铁虫 (初入文坛)
★
yidaqunyan(金币+1,VIP+0):谢谢你的关注，朋友~ 2-20 15:19
我们倒平板时，没实测过温度，但是用手拿起三角瓶（培养基我们是用三角瓶装，灭菌的），不烫手，就是手能拿得住。上述意见，仅供参考！
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4楼2009-02-20 14:34:35
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Lixiaolang

铁虫 (初入文坛)
★
yidaqunyan(金币+1,VIP+0):你好，谢谢你的关注 2-21 23:54
另外，比如你倒一个平板大约15-20ml LB培养基，灭菌前就分装为这个体积，抗生素在培养基温度适合时，加入到小三角瓶中（15-20ml 培养基），快速混匀，倒平板。个人操作经验。
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5楼2009-02-20 14:37:27
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smallcat227

木虫 (著名写手)
等培养基凉了后，加氯霉素混匀了再倒平板
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6楼2009-02-20 14:46:04
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goses

金虫 (小有名气)
60°明显是高了，培养基一般是放凉到40°以下才倒板
再者，倒板之后再加抗生素容易浓度不均匀，应该在瓶里混匀再倒

[ Last edited by goses on 2009-2-21 at 01:57 ]
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自己不曾拥有，就快乐地欣赏别人的拥有，不让日子沦于黯淡，不让心绪隐于灰颓
7楼2009-02-21 01:55:38
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luckyan110

★
yidaqunyan(金币+1,VIP+0):你好，谢谢你的耐心解答 2-21 23:55
我们实验室也是以发酵为主的 一般是先将固体培养基加热化开，待至温度不烫手适宜，加入氯霉素后，要充分振荡，使其混匀，再进行倒板培养。
另外，不同菌株对其浓度的要求与极限不一样。
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8楼2009-02-21 11:29:28
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jnckkang

金虫 (小有名气)
不应该啊，我刚做的25还很好
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9楼2009-02-22 14:36:02
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