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glzeng金虫 (小有名气)
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[交流]
【求助】凝胶过滤中的问题
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各位虫子，大家好，我现在在做一个分子量为8-9KDa的产品，但是中间夹杂了一些分子量为200-600Da的小分子，用透析的方法也试过，但是总是掌握不好透析的时间，每次浓缩之后去检测都发现还有一小部分没透析出去，再说如果以后放大的话用透析也不方便，挺头疼的。后来我用sephadex G50（分离极限为20KDa左右）做填料进行凝胶过滤，可是总是分不开，这是怎么回事，是我选择的凝胶不对么？我用G25也试过，好像也是分不开，这是怎么回事？另外用凝胶过滤的时候前30分钟出来的是分子量大于20KDa的组分吗？这个我也一直没搞明白，只是发现这部分的组分有些浑浊，感觉是溶解性不太好的组分。 [ Last edited by zhangwj on 2009-2-19 at 23:33 ] |
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cpumantiszj
木虫 (小有名气)
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yusen_1982(金币+2,VIP+0):欢迎常来!谢谢交流! 2-21 16:45
wgcui(金币+0,VIP+0):贴切！！！谢谢 2-21 21:31
glzeng(金币+5,VIP+0):谢谢，不知道还有没有机会继续和你交流！如果可以，给我留个联系方式好吗？ 2-23 22:17
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楼主可否把问题说的更明白些？比如目标产品的理化性质（可溶，难溶？蛋白？高分子？），小分子的来源及性质（制备产品的原料还是副产物或者？） 根据你的问题，我觉得还是比较正常的 透析是一种传统而温和的分离纯化方式，最适合于生物活性高而不稳定大分子（蛋白，抗体等）的纯化，由于其温和，因而很难把杂质除干净，这是因为透析是基于自由扩散平衡原理，而小分子通常由于和大分子之间有一定的作用力（静电引力，非特异性吸附，疏水缔合等），在这种自由扩散下很难完全除净 过凝胶柱同样存在着上述的问题，即二者的结合力使得在过柱时很难分开，因而有部分小分子会随着大分子同时出来，理论上你的目标产品和杂质是很适合用G50来分的，但实际上是不可能完全纯化的。 为此，在下有一些不知是否管用的建议供你参考： 1. 如果小分子是弱酸弱碱类物质，而你的目标物在一定的pH范围内又很稳定，建议你调节pH使得小分子呈解离态，并适当增加透析液的盐浓度，从而较好的除去杂质（若之后还想除去盐离子，则可用纯水继续透析） 2. 如果样品溶解度较好，尽量在上样时浓度高些，这样拖尾情况可改善 3.如果杂质溶解度不好，在不影响产品性质前提下，调整透析液或洗脱液的性质，使杂质尽量可溶，从而除去 4.楼主的样品纯化后作何用？如果对杂质限量没有太高要求，可以适当模糊化，先进行后续的实验 献丑了，哈哈 |
2楼2009-02-21 16:05:13