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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白质纯化 提高浓试方法
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悟天-小木

铜虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白质纯化 提高浓试方法

纯化了一个蛋白，极其必要，但浓度不够。通过超滤离心浓缩，达到一定浓度后便不能继续往下浓缩了，请问大家还有什么方法可以提高极浓度同时确保蛋白不会析出或沉淀。
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1楼 2017-10-18 23:15:14
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

chaiyin1991

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
柱子纯化，时间短，效率高，浓缩成小体积然后冻干。。。
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17楼2017-12-13 09:12:42
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zyy535200

新虫 (著名写手)
★
悟天-小木(金币+1): 谢谢参与
好的

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2楼2017-10-18 23:21:21
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)
★
悟天-小木(金币+1): 谢谢参与
你所说的“达到一定浓度后便不能继续往下浓缩了”是指继续离心虽然体积继续减少但是不能提高浓度了？ 还是因为体积不会继续减少了？
有一种方法浓缩，就是先拿到固体形式的蛋白，如加硫酸铵析出收集沉淀或者冻干蛋白溶液，再加入少量的水溶解，当然取决于你的蛋白的稳定性。
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5楼2017-10-19 08:31:08
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
★
悟天-小木(金币+1): 谢谢参与
冻干等等方法都可以。
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6楼2017-10-22 19:10:55
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我叫不知道你

新虫 (初入文坛)
★
悟天-小木(金币+1): 谢谢参与
你是可溶蛋白吗

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11楼2017-11-01 13:00:23
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mailmrcai

铜虫 (正式写手)
冻干

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14楼2017-11-04 15:31:08
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mailmrcai

铜虫 (正式写手)
真空挥发

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15楼2017-11-04 15:31:17
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teng-qian

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们有一种快速浓缩的柱子，有没有兴趣试一下，半个小时处理完，实验室级别
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16楼2017-11-14 20:52:52
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Roger dong

新虫 (初入文坛)
冻干

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18楼2018-02-04 13:49:36
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talSDU

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
using (NH4)2SO4 is a good method to concentrate the protein

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19楼2018-02-05 00:16:33
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Sjasp

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
少量沉淀是正常的。保证大部分溶液是溶液即可。我之前浓缩蛋白，也是这样。浓缩到10mg/mL以上，就有沉淀出现。点板之前，将盛蛋白的EP管稍微离心下，取上清即可。我有管15mg/mL的蛋白质，有沉淀，一样可以长晶体。过Ni柱澄清，透析后浑浊。所以后来将过DEAE柱前的透析液pH加以调整，可减少沉淀量。

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20楼2018-02-08 17:05:39
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qpeng1983

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果是浓缩的蛋白浓度过高导致蛋白沉淀，可以调整浓缩的体系，或者加入保护剂什么的。
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21楼2018-02-24 14:31:47
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gengxin603楼
2017-10-18 23:25   回复  
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syhorchid4楼
2017-10-19 00:34   回复  
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nono20097楼
2017-10-22 22:13   回复  
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sz_kebaoyuan8楼
2017-10-22 22:57   回复  
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nono20099楼
2017-10-27 21:16   回复  
sz_kebaoyuan10楼
2017-10-27 23:14   回复  
翻译润色论文12楼
2017-11-01 15:18   回复  
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彭清壹13楼
2017-11-01 17:11   回复  
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