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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hanyu9217

木虫 (正式写手)

[交流] 谁知道怎么测定漆酶活性

小弟现在在做凋落物的实验,想做木质素酶的方面
但是不知道漆酶的测定方法
想问问谁做过啊
并希望给点意见啊

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-16 at 12:29 ]
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cuizhifang

木虫 (小有名气)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 2-21 12:06
漆酶活力测定方法——愈创木酚法
50mmol/L琥珀酸钠为缓冲液(pH4.5),在10mL反应混合液中含0.04mmol愈创木酚和1mL粗酶液,30℃反应30min后,于465nm处测定吸光度。以灭活的酶液反应混合液为对照[18]。
注意事项:
a 底物愈创木酚用95%乙醇溶解,使1mL乙醇中溶有0.04mmol愈创木酚,即4.5µL
b 50mmol/L琥珀酸钠缓冲液(pH4.5)的配制方法:称取NaOH1g,琥珀酸5.9g,溶于蒸馏水800mL,然后用1mmol/L的NaOH溶液调pH至4.5,定容至1000mL
c 反应体系:
1mL 95%乙醇(溶有0.04mmol愈创木酚)+1mL粗酶液+8mL琥珀酸钠缓冲液
d 酶液灭活方法:沸水浴中2——5分钟
粗酶液制备
发酵液经7200r/min离心,上清液即为粗酶液。酶活高时用琥珀酸钠缓冲溶液适当稀释。
酶活单位定义:
1min内催化氧化1nmol愈创木酚的酶量为1个酶活单位(U)。
酶活计算公式:
酶活(U/mL)=10的6次方* V总*ΔA/(V酶*ε*Δt)                      (式1)
其中V总、V酶分别代表反应体系的总体积及反应酶液的体积
ε为吸光系数,愈创木酚的ε465=1.21×104mol-1•L•cm-1)
7楼2009-02-20 23:17:56
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普通回帖

qwj_1001

木虫 (著名写手)

这个简单,不过还得查查资料给你回复
我们来自五湖四海为了一个目标聚集在这里,使我们获得知识。
2楼2009-02-19 08:09:46
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qwj_1001

木虫 (著名写手)

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来生物版~ 2-20 22:31
漆酶(Lacease)[5’]:将o.5mL3.36mM邻联甲苯胺、3.4mLo.IM醋酸缓
冲溶液(pH4.6)、和0.lmL酶液混合于28摄氏度反应10min,在600nm测吸光值。
酶活以吸光率的增值表示:以△A=0.1规定为一个相对酶活单位。


参考文献:潘迎捷等,香菇和平菇生长发育中漆酶、酪氨酸酶和纤维素酶活性的变化
[J].上海农业学报,1991,7(2):21一26.

[ Last edited by qwj_1001 on 2009-2-19 at 08:19 ]
我们来自五湖四海为了一个目标聚集在这里,使我们获得知识。
3楼2009-02-19 08:17:36
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qwj_1001

木虫 (著名写手)

楼主你也太不象话了。。。。
连句感谢的话都不说
我们来自五湖四海为了一个目标聚集在这里,使我们获得知识。
4楼2009-02-20 16:05:11
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hanyu9217

木虫 (正式写手)

大兄弟啊
我不是不想谢谢你啊
我错了!
希望你能原谅啊!

[ Last edited by hanyu9217 on 2009-2-20 at 22:14 ]
5楼2009-02-20 22:11:07
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hanyu9217

木虫 (正式写手)



[ Last edited by hanyu9217 on 2009-2-20 at 22:40 ]
6楼2009-02-20 22:16:33
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qwj_1001

木虫 (著名写手)

别人回帖,你应该感谢一下啊
我们来自五湖四海为了一个目标聚集在这里,使我们获得知识。
8楼2009-02-21 10:00:35
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hanyu9217

木虫 (正式写手)

谢谢各位的帮助
也祝你们实验顺利哈哈!!
原谅我就好啊
9楼2009-02-23 12:57:10
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little-worm

银虫 (正式写手)

如何测定GUS 的活性呢? 先谢谢了。
10楼2009-02-27 00:37:53
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