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hanyu9217木虫 (正式写手)
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[交流]
谁知道怎么测定漆酶活性
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小弟现在在做凋落物的实验，想做木质素酶的方面 但是不知道漆酶的测定方法 想问问谁做过啊 并希望给点意见啊 [ Last edited by 350784478 on 2009-10-16 at 12:29 ] |
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漆酶活力测定方法——愈创木酚法 50mmol/L琥珀酸钠为缓冲液（pH4.5），在10mL反应混合液中含0.04mmol愈创木酚和1mL粗酶液，30℃反应30min后，于465nm处测定吸光度。以灭活的酶液反应混合液为对照[18]。 注意事项： a 底物愈创木酚用95%乙醇溶解，使1mL乙醇中溶有0.04mmol愈创木酚，即4.5µL b 50mmol/L琥珀酸钠缓冲液（pH4.5）的配制方法：称取NaOH1g，琥珀酸5.9g，溶于蒸馏水800mL，然后用1mmol/L的NaOH溶液调pH至4.5,定容至1000mL c 反应体系： 1mL 95%乙醇（溶有0.04mmol愈创木酚）+1mL粗酶液+8mL琥珀酸钠缓冲液 d 酶液灭活方法：沸水浴中2——5分钟 粗酶液制备 发酵液经7200r/min离心，上清液即为粗酶液。酶活高时用琥珀酸钠缓冲溶液适当稀释。 酶活单位定义: 1min内催化氧化1nmol愈创木酚的酶量为1个酶活单位（U）。 酶活计算公式: 酶活（U/mL）=10的6次方* V总*ΔA/(V酶*ε*Δt) （式1） 其中V总、V酶分别代表反应体系的总体积及反应酶液的体积 ε为吸光系数，愈创木酚的ε465=1.21×104mol-1•L•cm-1) |
7楼2009-02-20 23:17:56
qwj_1001
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2楼2009-02-19 08:09:46
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漆酶(Lacease)[5’]:将o.5mL3.36mM邻联甲苯胺、3.4mLo.IM醋酸缓 冲溶液(pH4.6)、和0.lmL酶液混合于28摄氏度反应10min，在600nm测吸光值。 酶活以吸光率的增值表示:以△A=0.1规定为一个相对酶活单位。 参考文献：潘迎捷等，香菇和平菇生长发育中漆酶、酪氨酸酶和纤维素酶活性的变化 [J].上海农业学报，1991，7(2):21一26. [ Last edited by qwj_1001 on 2009-2-19 at 08:19 ] |
3楼2009-02-19 08:17:36
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6楼2009-02-20 22:16:33
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