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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » bac-to-bac转染是否成功
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半点心

金虫 (正式写手)

[求助] bac-to-bac转染是否成功 已有1人参与

楼主提取bacmids, PCR验证有目的条带。做转染的时候看到细胞病态了，与做阴性对照的细胞相比，细胞直径明显变大，而且少。为什么做SDS-PAGE的时候，蛋白不表达呢？我们做的是his标签的蛋白
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该签名无法显示,系统分析两种可能:一.你需要重新启动电脑;二.你的诚意不够,欲解决,马上邀请该联系人吃饭..
1楼 2017-10-12 15:27:25
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2011sp

铁杆木虫 (著名写手)
滴度没优化的原因。

发自小木虫Android客户端
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2楼2017-10-12 17:27:33
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、看了说明书，好像是不要加FBS的培养基来表达蛋白，但是加FBS的培养基也能表达家蚕的内源蛋白。
2、时间。说明书上说是可以做个时间梯度，48-96小时，做3个梯度。
3、细胞密度。要求是70%的密度，密度在70%能正常发病。
4、MOI我没有检测。不检测发病，基因目的片段能检测到，可能SDS-PAGE、western都检测不到。
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及时行乐，人生不留遗憾！
3楼2017-10-12 20:55:49
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