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msssgdmn123新虫 (小有名气)
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[求助]
跑PCR后带型总是很丑 已有2人参与
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跑出的条带是弯曲的，感觉两边跑的快，中间跑的慢，不知道是什么原因，但是marker跑的还可以，最近都是这种情况，简直要疯，电压一直用的不大，80,70,60都用过，都是这样 发自小木虫Android客户端 |
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ken19860823
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8楼2017-10-09 07:40:34
msssgdmn123
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2楼2017-10-08 16:57:45
mlxmiao
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3楼2017-10-08 19:00:59
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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个人观点，胶凝结时间不够（放在冰箱静置一段时间效果是不错），拔梳子出现问题外，还有可能是以下方面的原因： 1、电泳时电压稍高，造成条带弯曲，楼主可以在刚开始电泳的时候用较低电压，等产物跑进凝胶一段距离后再把电压调大，甚至就使用稍低的电压，当然也不能太低，如果跑得时间太长，PCR产物也会降解，条带淡化。 2、倒胶时是不是温度比较低，造成的胶不均匀，我看楼主的胶比较均匀，所有条带都是W型，不是这方面的问题。 3、感觉楼主的上样量还是少了点，如果太少，会造成上样产物随着移液器的打入呈现弯曲的形状，电泳结果也可能会这样，建议楼主加大上样量，这样PCR产物充满点样孔就会比较直，比较均匀。 |
4楼2017-10-08 20:00:21
