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msssgdmn123

新虫 (小有名气)

[求助] 跑PCR后带型总是很丑 已有2人参与

跑出的条带是弯曲的,感觉两边跑的快,中间跑的慢,不知道是什么原因,但是marker跑的还可以,最近都是这种情况,简直要疯,电压一直用的不大,80,70,60都用过,都是这样

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msssgdmn123

新虫 (小有名气)

2楼2017-10-08 16:57:45
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mlxmiao

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by msssgdmn123 at 2017-10-08 16:57:45
这是照片

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3楼2017-10-08 19:00:59
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人观点,胶凝结时间不够(放在冰箱静置一段时间效果是不错),拔梳子出现问题外,还有可能是以下方面的原因:

1、电泳时电压稍高,造成条带弯曲,楼主可以在刚开始电泳的时候用较低电压,等产物跑进凝胶一段距离后再把电压调大,甚至就使用稍低的电压,当然也不能太低,如果跑得时间太长,PCR产物也会降解,条带淡化。
2、倒胶时是不是温度比较低,造成的胶不均匀,我看楼主的胶比较均匀,所有条带都是W型,不是这方面的问题。
3、感觉楼主的上样量还是少了点,如果太少,会造成上样产物随着移液器的打入呈现弯曲的形状,电泳结果也可能会这样,建议楼主加大上样量,这样PCR产物充满点样孔就会比较直,比较均匀。
及时行乐,人生不留遗憾!
4楼2017-10-08 20:00:21
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wrxnyd54

木虫 (著名写手)


观看中
5楼2017-10-09 00:17:33
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ken19860823

木虫 (正式写手)

做基因修饰的老菜鸡
6楼2017-10-09 07:38:40
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ken19860823

木虫 (正式写手)

做基因修饰的老菜鸡
7楼2017-10-09 07:39:00
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ken19860823

木虫 (正式写手)

marker没问题说明不是电泳问题,应该是pcr阴性结果吧,带一个阳性pcr可以排除很多问题。

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做基因修饰的老菜鸡
8楼2017-10-09 07:40:34
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ugzecb036

木虫 (著名写手)


帮你项项吧
9楼2017-10-09 10:13:46
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635270fmaifx

铜虫 (初入文坛)

你好,从图中可以看出,你的pcr引物特异性不是特别好,有好多非特异性扩增,还有你的mark跑的不错,就要考虑你的pcr产物效果啦供参考

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10楼2017-10-09 13:57:37
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