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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定量PCR引物溶解曲线问题
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2009103158

新虫 (著名写手)

[交流] 定量PCR引物溶解曲线问题

我做定量PCR在一板96孔板中试了43对引物，想看下引物的溶解曲线情况。
问题：1，扩增的结果表明（见附图1）各引物除了在91度之前有一个正向峰外，又都在94度附近有一个反向峰，并且大部分引物的反向峰比正向峰还要峰值绝对值要搞，请问这是为什么？
          2，根据引物的溶解曲线该如何衡量和判定引物可不可用？有没有对溶解温度（有没有合适的范围？有些引物溶解温度达到了90度），峰型（高度，坡度等）等细化的指标来判断，见附图2。
          3，在刚开始温度递增的前期阶段，部分引物会有一个凹陷，请问是为什么？见附图3
          4，对每个引物分别用稀释2倍和稀释8倍后的模板进行扩增，结果发现部分引物两次扩增的溶解温度之间有一定的偏差，这是为什么？见附图4
请教大虾指教！谢谢！！！

定量PCR引物溶解曲线问题
附图1.jpg


定量PCR引物溶解曲线问题-1
附图2.jpg


定量PCR引物溶解曲线问题-2
附图3.jpg


定量PCR引物溶解曲线问题-3
附图4.jpg
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1楼 2017-10-04 00:14:55
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wrxnyd54

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
2009103158: 金币+1, 谢谢！ 2017-10-04 15:39:23
帮你顶，人还是厚道点好
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2楼2017-10-04 01:42:53
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山还在那儿

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
染料法？

一般染料法溶解曲线只有一个峰算是扩增产物专一，若标准曲线测试良好，则可用！

你的情况，我需要看一下原始的溶解曲线，即“Z”型溶解曲线，才能判断！
赞一下 回复此楼
3楼2017-10-09 09:35:15
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zoeyang_96

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我发现可能是仪器的问题，旧的7500就会出现这样的曲线。新的不会
赞一下 回复此楼
4楼2021-05-21 12:38:02
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