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2009103158新虫 (著名写手)
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[交流]
定量PCR引物溶解曲线问题
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我做定量PCR在一板96孔板中试了43对引物，想看下引物的溶解曲线情况。 问题：1，扩增的结果表明（见附图1）各引物除了在91度之前有一个正向峰外，又都在94度附近有一个反向峰，并且大部分引物的反向峰比正向峰还要峰值绝对值要搞，请问这是为什么？ 2，根据引物的溶解曲线该如何衡量和判定引物可不可用？有没有对溶解温度（有没有合适的范围？有些引物溶解温度达到了90度），峰型（高度，坡度等）等细化的指标来判断，见附图2。 3，在刚开始温度递增的前期阶段，部分引物会有一个凹陷，请问是为什么？见附图3 4，对每个引物分别用稀释2倍和稀释8倍后的模板进行扩增，结果发现部分引物两次扩增的溶解温度之间有一定的偏差，这是为什么？见附图4 请教大虾指教！谢谢！！！  附图1.jpg  附图2.jpg  附图3.jpg  附图4.jpg |
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