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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR模板不同，摸索的平台期循环数会变吗？
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yorkham

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR模板不同，摸索的平台期循环数会变吗？

还是做半定量RT-PCR的问题，在摸索引物的最佳退火温度和循环数时，我先摸好退火温度，但摸循环数时换了模板（几个循环都用这个模板），也找到了平台期，但我想问，假如我再换个模板的话，这个平台期会不会因模板不同而改变？（我做污染物浓度梯度对基因表达影响）
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1楼 2009-02-17 16:10:51
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
呃，这样吧，诀窍就是，抽完RNA，定量，摸好循环数
然后以后要重复实验的话，就必需加入当量的RNA去RT（浓了就稀释，少了就多加）
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2楼2009-02-17 16:37:08
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yorkham

铜虫 (小有名气)
我知道，我做梯度试验，一个正常组，一个处理组，提完RNA，RT时调好了模板的量（使加入的RNA量一样），但是用正常组模板摸的循环数和用处理组模板摸的循环数会一样吗？我只做了35循环的，这两个处理组的灰度是不一样的(一样的话我设的梯度也没意义了，呵呵)
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3楼2009-02-17 17:04:37
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
一样的啊~不就是为了比较control和处理的某个基因的mRNA水平差异吗
比如预想中control高于处理
那么用control的摸，摸到刚好有条带或者稍微亮一点的循环数，就确定下来了
处理组可能这个循环还扩不出来（最理想，有和无的区别就不需要所谓的统计学）
或者条带很淡之类的

35个循环，也太多了
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4楼2009-02-17 18:08:55
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yorkham

铜虫 (小有名气)
好，谢谢三磷酸腺苷，十分感谢
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5楼2009-02-17 20:27:05
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